今天瑞禧生物小編為大家分享的是外泌體修飾微小RNAs/RNA-338/miRNA/miR-221-3p/miRNA-126/microRNA-135a的制備與研究過程，和小編一起來看看吧！

外泌體修飾微小RNAs的制備：

外泌體是一類介導(dǎo)體內(nèi)生物信息分子傳遞的納米級(jí)小囊泡",外泌體能在體內(nèi)運(yùn)載和傳遞生物信息分子,在免疫調(diào)節(jié)、心血管疾病和腫瘤等生理病理過程中發(fā)揮著重要的功能。外泌體可由體內(nèi)各種活細(xì)胞分泌,體液中含量很高,每微升血清中外泌體數(shù)量可達(dá)3× 106其攜帶的RNA、蛋白質(zhì)和脂類等生物信息分子會(huì)隨疾病進(jìn)展轉(zhuǎn)歸發(fā)生變化,是頗具臨床診斷價(jià)值的循環(huán)標(biāo)志物"。因此提取純度高,干擾少的外泌體及其內(nèi)容物用于后續(xù)臨床診斷有重要的實(shí)用價(jià)值。本研究取健康人血清為樣本,利用不同外泌體及外泌體RNA( exo-RNA)提取方法組合提取外泌體及其內(nèi)容物,并對(duì)提取所得外泌體和其內(nèi)蛋白質(zhì)、RNA進(jìn)行分析和比較,選取最適于提取外泌體與exo-RNA的實(shí)驗(yàn)方法。

評(píng)價(jià)超高速離心法、ExoQuick 與TEI試劑盒提取血清中外泌體的價(jià)值。方法方法學(xué)比較。收集2015年8至11月南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)科健康者3名,采集靜脈血至采血管,4℃靜置12 h使其自然凝固后離心取上清液為血清,采用超高速離心法、ExoQuick 與TEI試劑盒提取血清中外泌體,通過透射電子顯微鏡,蛋白印跡技術(shù)和NTA顆粒粒度分析儀檢測(cè)外泌體形態(tài)結(jié)構(gòu),蛋白表達(dá)量和濃度與粒徑分布,評(píng)估外泌體提取效率;采用超高速離心法＋Trizol IS法、ExoQuick+SeraMir TEI+TER與ExoRNeasy試劑盒提取法分離3例血清中外泌體總RNA ( exo-RNA ) ,利用Agilent生物分析儀分析RNA片段分布,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè) miRNA表達(dá)水平。組間蛋白濃度與miRNA表達(dá)量的比較采用方差分析。

外泌體提取方法中,比較外泌體濃度和其蛋白濃度,ExoQuick 與TEI試劑盒提取濃度高于超高速離心法;超高速離心法提取外泌體同時(shí)表達(dá)CD9,CD63和TSG101蛋白,而ExoQuick 與TEI試劑盒提取外泌體僅表達(dá)TSG101。外泌體RNA提取方法中,不同方法影響RNA片段分布和 miRNA表達(dá),未影響miRNA相對(duì)表達(dá)趨勢(shì);ExoRNeasy 提取RNA條帶濃度較高,各miRNA表達(dá)水平較高;TEI+TER法未見明顯RNA條帶,樣本中各miRNA表達(dá)水平穩(wěn)定;超高速離心法＋Trizol LS法與ExoQuick + SeraMir法提取RNA可見范圍較廣的低濃度條帶,此兩法提取RNA中各miRNA表達(dá)無明顯規(guī)律。結(jié)論﹑外泌體提取方法中傳統(tǒng)超高速離心法適用于蛋白組學(xué)方面研究,而ExoQuick 與TEI試劑盒提取方法適用于血清等稀缺樣本外泌體制備。

相關(guān)產(chǎn)品：

DIO染料標(biāo)記外泌體

DiD染料標(biāo)記外泌體

DiR染料標(biāo)記外泌體

綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記MSCs外泌體

PKH67熒光染料標(biāo)記外泌體

熒光標(biāo)記HeLa細(xì)胞外泌體

紅色熒光染料DIR標(biāo)記牙齦卟啉單胞菌來源外泌體

紅色熒光PKH26標(biāo)記iPS細(xì)胞外泌體

羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯（CFSE）標(biāo)記外泌體

外泌體標(biāo)記DiRIodide (DiIC18(7))細(xì)胞膜深紅色熒光探針

外泌體標(biāo)記CFDA熒光探針

外泌體標(biāo)記Celltracker CM-DiI 活細(xì)胞示蹤劑CM-DiI(紅色)

外泌體標(biāo)記Calcein, AM, Ultrapure Grade鈣黃綠素

RXYWX.2022.4.25