總生物堿的提取和親脂性與親水性生物堿的分離。

? ? ? ?漢防己甲素屬生物堿, 植物原料為粉防己(根)。 提取分離的原理為較高含量的或主要成分和溶解差異, 稱為酸水滲漉, 分離方法如下:

? ? ?低壓柱層析分離漢防已甲素和乙素：

? ? ? 低壓柱層析在低壓下(0.5～3kg/cm2, 一般0.3～1.2kg/cm2)采用顆粒直徑介于經(jīng)典柱層析(100～200μm)和 HPLC(～37μm)之間的薄層層析用硅膠(或氧化鋁)H或 G(50～ 75μm)作為填充劑的一種柱層析柱, 其基本原理與 HPLC相同, 分離效果也介于經(jīng)典柱與HPLC之間, 用減壓干法裝柱, 鋪層緊密均勻, 層析帶分布集中整齊, 同時薄層層析的最佳分離溶劑系統(tǒng)可以直接用于低壓柱層析, 它是一種分離效果較好, 設備簡單, 操作方便, 快速的方法。 適宜和于天然產(chǎn)物的常量制備性分離。

? ? ?(1)裝柱

? ? ? 減壓干法裝法 , 層析柱規(guī)格:柱長30cm, 內(nèi)徑2cm, 共裝硅膠約30g(高約 22cm)2.2 拌樣加樣 取漢防已堿約150mg, 加少量丙酮熱溶(剛?cè)転槎?用滴管加到1.5g硅膠上, 仔細拌勻, 水浴上蒸干, 碾細, 通過一個長頸漏斗小心加在柱頂, 輕輕垂直頓擊 , 待樣品表面平整不拌動時, 上面再蓋約 1～ 2cm高的空白硅膠, 再加蓋一園形濾紙片, 壓緊。

? ? ?(2)洗脫

先檢查從空壓機至層析柱各閥門管道是否正常, 關緊各個閥門, 開動空壓機至額定壓力 (5.8kg/cm2)待用。 用滴管順層析柱柱壁仔細加入少量洗脫劑(環(huán)已烷 -慚酸乙酯 -二乙胺 /6:2:0.8), 當液面達到一定高度時, 再一次加入其余洗脫劑(共約 250ml), 迅速在柱頂上裝上玻璃標口塞接頭, 用鐵夾壓緊 (防加壓時接頭沖開 ), 小心開啟空壓機閥門, 再開針形閥和空氣過濾減壓器, (注意:壓力過大。 玻璃柱會炸, 一般 2kg是安全的, 必要時可戴防護面罩 )調(diào)動所需壓力, 0.6～ 1.2kg/cm2, 約 40分鐘后流出, 控制流速 1ml/分, 每 10分鐘左右一管 , 收12～15份, 洗脫全過程約3小時。

? ? ?(3)檢查

各流份分別移入小玻璃蒸發(fā)器中 , 于水浴上濃縮, 分別通過 TLC檢查, 吸附劑:硅膠 G, 展開劑:環(huán)已烷 -乙酸乙酯 -二乙胺 /6:3:1, 改良碘化鉍鉀試劑噴霧顯色, 以漢防已甲素、乙素為標準品對照, 合并相同組分, 分別獲得甲、乙素粗品, 用丙酮重結(jié)晶, 測定。