自從片段化酶打斷DNA的方法在NGS（Next Generation Sequencing）中廣泛應(yīng)用后，片段化酶建庫(kù)就占據(jù)了基因組建庫(kù)的半壁江山。

但是，目前市面上的片段化酶建庫(kù)試劑盒仍然存在一定的局限性，如打斷效果不均一；存在EDTA的敏感性等等。而超聲建庫(kù)雖然存在成本高，損失大等缺點(diǎn)，但是其無(wú)偏好的打斷效果仍然是NGS建庫(kù)的金標(biāo)準(zhǔn)。

表1. 各品牌片段化酶試劑盒對(duì)EDTA的敏感性

愛(ài)博泰克（ABclonal）近些年不斷浸心片段化酶的研發(fā)和生產(chǎn)，已陸續(xù)推出了多款片段化酶建庫(kù)試劑盒（）。

這些建庫(kù)試劑盒在幫助我們的客戶完成科學(xué)研究的同時(shí)，也在不斷接收客戶的反饋和意見(jiàn)。現(xiàn)在，經(jīng)過(guò)ABclonal科學(xué)家的潛心研發(fā)，我們正式推出了片段化酶建庫(kù)的迭代版本—FS Pro DNA Lib Prep Kit V2（ABclonal CAT.NO. BK0056）。

FS Pro DNA Lib Prep Kit V2試劑盒在本次升級(jí)中解決了兩大突破性難題：片段化酶對(duì)EDTA的敏感性；試劑背景菌的控制。

將100 ng NA12878 標(biāo)準(zhǔn)品DNA，分別溶于32 μL的1X TE Buffer（1mM EDTA）、Low-EDTA TE、EB（elution buffer）、Nuclease-Free Water和Tris HCl pH 7.5中，使用FS Pro DNA Lib Prep Kit V2進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建。

所有溶劑的DNA樣本均采用32 ℃ 15 min的片段化時(shí)間，所構(gòu)建文庫(kù)使用Agilent DNA 1000 Chips進(jìn)行片段大小分析。

從文庫(kù)質(zhì)控的峰圖中可以看出，使用不同溶劑溶解的NA12878標(biāo)準(zhǔn)品DNA所構(gòu)建的文庫(kù)片段大小一致，主峰沒(méi)有偏差，文庫(kù)片段分布均勻。結(jié)果證實(shí)FS Pro DNA Lib Prep Kit V2中的片段化酶對(duì)于不同濃度的的EDTA溶劑具有良好的耐受性，且在不同的離子溶劑中都能維持穩(wěn)定的片段化效果！

圖1 .溶于不同溶劑的DNA標(biāo)準(zhǔn)品文庫(kù)片段分布

從文庫(kù)質(zhì)控的峰圖中可以看出，片段化的時(shí)間越短，文庫(kù)片段越長(zhǎng)。片段化時(shí)間為15 min時(shí)，文庫(kù)主峰在350 bp左右；片段化時(shí)間為10 min時(shí)，文庫(kù)主峰在450 bp左右。客戶可以根據(jù)自身需要來(lái)調(diào)整片段化時(shí)間，得到預(yù)期的文庫(kù)長(zhǎng)度。

圖2. 不同片段化時(shí)間的DNA標(biāo)準(zhǔn)品文庫(kù)片段分布

宏基因組高通量測(cè)序技術(shù)（mNGS）通過(guò)對(duì)臨床樣本中微生物和宿主核酸的測(cè)序分析,可以無(wú)偏倚地檢測(cè)多種病原微生物,正在逐漸應(yīng)用于臨床感染性疾病病原檢測(cè)。如何盡可能減少試劑和環(huán)境來(lái)源中的背景菌對(duì)結(jié)果判讀的干擾，是mNGS技術(shù)檢測(cè)規(guī)范化的重要保障。

FS Pro DNA Lib Prep Kit V2試劑盒的生產(chǎn)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控體系 ，試劑背景菌控制較好，殘留極低，適合用于mNGS檢測(cè)中的文庫(kù)構(gòu)建。

我們將1 ng NA12878標(biāo)準(zhǔn)品DNA使用FS Pro DNA Lib Prep Kit V2進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，并進(jìn)行測(cè)序分析。分析結(jié)果顯示，20種常見(jiàn)關(guān)注的致病菌中，兩次測(cè)試均未檢出致病菌reads。這表明FS Pro DNA Lib Prep Kit V2的試劑材料品質(zhì)極高，可以用于mNGS的檢測(cè)中。

表2. 20種常見(jiàn)關(guān)注致病菌的檢出統(tǒng)計(jì)