玻璃化及防治

組培苗的玻璃化

在進行植物組織培養(yǎng)時，經常會發(fā)現(xiàn)試管苗生長異常，表現(xiàn)為試管苗葉、嫩梢呈水晶透明或半透時，水浸狀；整株矮小腫脹、失綠；葉片皺縮成縱向卷曲、脆弱易碎；葉表缺少角質層蠟質，沒有功能性氣孔，不具有柵欄組織，僅有海綿組織。這種試管苗生長異?，F(xiàn)象就是?“玻璃化”（Vitrification），是植物組織培養(yǎng)過程中所特有的一種生理失調或生理病變。玻璃苗中因其體內含水量高，干物質、葉綠素、蛋白質、纖維素和森質素含量低、角質層、柵欄組織等發(fā)育不全，表現(xiàn)為光合能力和酶活性降低，組織畸形，器官功能不全，分化能力降低，所以很難繼續(xù)用作繼代培養(yǎng)和擴大繁殖的材料；生根困難，移栽后也很難成活。

植物微體快速繁殖時玻璃苗的出現(xiàn)已成為一種很普遍的現(xiàn)象，該苗有時多達50%以上，嚴重影響繁殖率的提高，已成為莖尖脫毒、工廠化育苗和材料保存等方面的嚴重障礙，造成人、財、物的極大浪費，所以試管苗下班化現(xiàn)象對植物組織培養(yǎng)的危害是相當嚴重的，也是亟待解決的問題。

導致玻璃化的主要因素：

1．材料差異，在不同的種類、品種間，組培苗的玻璃化程度有所差異。

2．激素水平過高，若細胞分裂素濃度過高或細胞分裂素與生長素相對含量高，易引起玻璃化現(xiàn)象。

3．培養(yǎng)基水勢，培養(yǎng)基中離子種類，比例不適。

4．環(huán)境溫度、光照強度和通氣性。溫度過低或過高，光照時間強度不足及培養(yǎng)容器中空氣濕度過高，透氣性較差所造成的通氣不良，易造成組培苗含水量高，從而發(fā)生玻璃化現(xiàn)象。

5．瓊脂濃度降低、有雜質等。

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常用的防治措施有：

1．增加光照強度和光照時數(shù)。

2．降低細胞分裂素含量。在培養(yǎng)基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質，能夠在一定程度上減輕玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生。

3．增大培養(yǎng)基中瓊脂的含量，以降低培養(yǎng)基的水勢。

4．降低NH4+濃度，減少培養(yǎng)基中含氮化合物的用量。

5．增加容器通風，最好進行?CO2施肥，這對減輕組培苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)，有助于減輕組培苗玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生。

組培苗的黃化及防治

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組培苗的黃化

黃化是指在組培過程中由于培養(yǎng)基成分、環(huán)境、激素、碳水化合物等各種因素引起的幼苗整株失綠，全部或部分葉片黃化、斑駁。這一現(xiàn)象在植物組織培養(yǎng)中比較常見，特別在部分木本植物、花卉中較為常見。

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影響組培苗黃化的因素

1、培養(yǎng)基中Fe的含量不足, 各礦質營養(yǎng)不均衡；

2、培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶內乙烯含量升高；

3、激素配比不當；

4、PH值變化過大；

5、糖用量不足或長時間不轉移糖已耗盡；

6、培養(yǎng)溫度不適；光照不足等。

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防治組培苗黃化的方法

1、首先在配制母液和培養(yǎng)基的制作過程中，要檢查儀器設備是否準確，還要認真細致地核對每項稱量的每一個環(huán)節(jié)；

2、使用透氣的封口膜以改善瓶內通氣狀況；

3、適當調節(jié)pH值、激素配比和無機鹽濃度；

4、配制培養(yǎng)基時切記不要忘記加糖,及時轉接培養(yǎng)物；

5、控制培養(yǎng)室內的溫度,適當增加光照；

6、在培養(yǎng)基中添加抗生素類物質如青霉素、鏈霉素、頭孢霉素等，有時也會出現(xiàn)幼苗黃化現(xiàn)象，應適當減少用量或停止使用。

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組培苗的褐變及防治

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組培苗的褐變

很多種類的植物體中含有大量多酚類化合物，切取芽時的創(chuàng)傷會激活組織中的多酚氧化酶，將多酚類物質氧化為棕褐色的醌類物質，使外植體的切口處發(fā)生褐變，產生可見的茶色、褐色或黑色，此即謂“酚污染”。醌類物質會滲透到培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基褐化，其結果是嚴重影響培養(yǎng)物的生長和分化，甚至造成培養(yǎng)物死亡。在木本植物，尤其是熱帶木本植物及少量草本植物中，此現(xiàn)象較為嚴重。

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影響褐變的因素

植物的種類褐基因型、外植體的來源和生理狀況以及培養(yǎng)基的成分都會不同程度的影響褐變的程度。一般木本植物的外植體比較容易產生褐變現(xiàn)象，在成年樹尤其嚴重。培養(yǎng)基中含酚過高會導致褐變，含過高濃度的無機鹽和肌醇也會加劇外植體的褐變。6-芐氨基嘌呤（6-BA）和激動素（KT）也有誘導褐變的作用。強光和高溫同樣會促進褐變現(xiàn)象。

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防治褐變的方法

1、在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑是防止褐變的有效措施。

常用的抗氧化劑有抗壞血酸（VC）、檸檬酸、半胱氨酸、二硫蘇糖醇和聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等，該類藥劑一般需用濃度為50-200mg/L。

具體方法如下：

（1）用經過濾滅菌的抗氧化劑溶液洗滌剛切割的外植體傷口表面；

（2）將抗氧化劑加入固體培養(yǎng)基的表層；

（3）將剛切割的外植體浸入其中一定時間，

（4）或者在抗氧化劑溶液中切割和剝離外植體。

（5）必要時還可以將幾種抗氧化劑結合使用。

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2、在培養(yǎng)基中加入活性炭，吸附對生長有抑制作用的褐色醌類物質。

?一般認為，活性碳主要吸附非極性物質及色素大分子，可以減少一些有害物質的影響，但是具體吸附的選擇性很差，溫度低時吸附力增強，溫度高時吸附力減弱，甚至會解吸附。通?；钚蕴康氖褂脻舛葹?.5-10g/L。大量活性炭的加入會削弱瓊脂的凝固能力，因此要多加些瓊脂；很細的活性炭容易沉淀，因此通常在瓊脂將要凝固時，需輕輕搖動培養(yǎng)瓶；應當注意的是：活性炭也能吸附培養(yǎng)基中的激素類物質，影響莖尖的分化和生長，因此在使用活性炭的場合，需要適當提高培養(yǎng)基中激素的濃度。

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3、不斷地（每隔1～2d）將培養(yǎng)物轉移到新鮮的培養(yǎng)基上，以擺脫老培養(yǎng)基中褐色物質的不利影響。在使用液體培養(yǎng)基的情況下，這種方法相當有效。

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4、為了防止外植體的褐變，需要選取酚類化合物含量較低的實驗材料，選擇無機鹽含量較低，不加肌醇的培養(yǎng)基，并在較弱的光線或黑暗的條件中進行培養(yǎng)。

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5、易發(fā)生褐變的植物在進行組織培養(yǎng)時，先進行預培養(yǎng)（即培養(yǎng)在基礎培養(yǎng)基中）2-3天（如果分泌物多，如利用花魔芋的球莖進行組織培養(yǎng)時，適當延長預培養(yǎng)時間并多次更換培養(yǎng)基），再培養(yǎng)到添加了激素的培養(yǎng)基上。

組培常遇見的問題

兩次培養(yǎng)基用的配方都一樣，為什么一個凝固的特好，一個就凝固不了？

培養(yǎng)基的凝固與否無外乎有下列幾種情況：

1、瓊脂批次有變，沒有做批次試驗，沿用以前的用量造成不足。

2、大量元素重復加入，或大量元素母液配制時出錯。

3、pH值調的過低，或有活性炭高壓滅菌時間過長，造成蔗糖分解量劇增，影響培養(yǎng)基的pH值降低較多。

4、加入新的天然附加物，或附加物過多。

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75%的酒精和70%的酒精有什么區(qū)別，組培時用哪種好?

酒精的70%和75%都是可以的，但往往由于桶裝酒精的濃度達不到95%，這樣按照70%的配制就達不到要求了，因此我們一般是桶裝按照75%的配，瓶裝則按照70%的配。

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大型滅菌器在滅菌的時候總會出現(xiàn)個別瓶子破裂的現(xiàn)象，請問什么原因？是溫度過高，壓力過大，還是內部冷熱不均造成的呢？

高壓滅菌造成玻璃瓶的破裂，特別是大型滅菌裝置，最主要還是在放氣冷卻時造成的。究其原因，應該是在放氣時，由于容積較大，壓力在不同位置（內外部）的變化速度并不相同，致使瓶內與瓶外的壓力差距較大，如果是封口膜，表現(xiàn)的可能就是塑料膜的破裂。

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初代培養(yǎng)時，外植體出現(xiàn)發(fā)白，慢慢枯死，是什么原因？

外植體的初代培養(yǎng)出現(xiàn)這種情況，是比較好理解的。大田植物材料離體以后，進入不同環(huán)境中繼續(xù)生存代謝，需要一個過渡。

首先，植物材料要吸收培養(yǎng)基的養(yǎng)分，不再是根吸收，鹽類濃度相對于離體的植物材料的吸收能力可能是過量的，植物材料褪色就是葉綠素形成受阻和細胞代謝受阻，另外培養(yǎng)基養(yǎng)分供應的有效性滯后，以及植物材料本身內含物向培養(yǎng)基的流失等等。建議在初代培養(yǎng)階段最好先采用空白培養(yǎng)。

做無毒苗的快繁，一直找不到合適的培養(yǎng)基，能不能幫我推薦一種？

關于組培快繁的方式概括起來有下列兩種途徑：

1、外植體－愈傷組織－再生芽－繼代－生根－出苗

2、外植體－叢生芽－繼代－生根－出苗

至于采取那種途徑，需要徹底了解所選組培植物的生物習性，包括繁殖方式，頂端優(yōu)勢，萌孽生根能力等。

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一般情況下KT的母液應該配成多大濃度？IAA能高壓滅菌嗎？高壓滅菌成分會變嗎？

KT一般配成0.05－0.1ppm。IAA極不耐高壓滅菌，一般采用過濾滅菌。如果利用高壓滅菌其分解率會在85%以上，致使其作用不明顯。

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請問植物病毒檢測的簡便方法？

由于經過脫毒處理，即使未完成脫除病毒的植株，其體內病毒的含量也會較低，常常在最初的一、二次病毒檢測中呈陰性，因此有人建議在前18個月內，必須對植株進行若干次檢測。目前常用的植物病毒檢測方法有可見癥狀鑒定、寄生鑒別、抗血清檢測、電鏡檢測、分子檢測等。

可見癥狀鑒定法較簡單，但準確性差，對于不表現(xiàn)可見癥狀的隱癥病毒幾乎無效；而電鏡檢測、分子檢測雖然檢測準確率高，但設備昂貴，尤其電鏡不可能每個組培室都配備，故未在生產上廣泛運用；目前生產上，國內外仍主要采用鑒別寄主的酶聯(lián)免疫檢測法檢測植物病毒。

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組培苗生長環(huán)境有何特點？如何針對這些特點提高移栽成活率？

組培苗煉苗是組培過程中較為重要的一個環(huán)節(jié)，是一個較為復雜的技術體系，提高煉苗成活率是決定組培成敗和降低組培成本的關鍵。

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試管苗一般在高濕（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒溫（25℃）下培養(yǎng)，生長的植株有以下幾個特點：（1）、葉片無保護組織（角質層、蠟質、表皮毛等），加之細胞間隙大，氣孔開張大，因此水分散失較快，易于萎蔫。(2)、根無根毛或極少，并且有些從愈傷組織上發(fā)育的根與芽的疏導組織不相同，因此吸水能力較弱。而當煉苗移栽時，環(huán)境有了極大的改變：濕度降低、光照增強、溫度升高、溫差變大。

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具有以上特點的組培苗，在此環(huán)境下，葉片失水較嚴重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸騰水量，從而造成植物萎蔫，煉苗失敗。另一種情況是，空氣溫度上升要比基質溫度上升快，而根系的吸水能力在一定范圍內與溫度是成正比的，當氣溫升高時，加之濕度較低，葉片蒸騰急速增加，此時基質溫度上不去，根系吸水能力不夠，造成蒸騰大于吸水的失衡狀態(tài)，從而萎蔫死亡。

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要想獲得高的煉苗成活率就得針對以上問題，一方面提高出瓶苗的質量，提高其抗逆性，生根前的壯苗、理想的生根配方和生根培養(yǎng)環(huán)境的調控是關鍵；另一方面就得有針對組培苗特點創(chuàng)造一個適宜的煉苗環(huán)境，比如保證空氣濕度，平衡空氣和基質的溫度平衡關系等。

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有些植物在組培生根階段會把大量元素和糖減半，根據(jù)什么來判斷是否需要減半？

在組培過程中，我們提起配方往往只局限于激素的配比和添加物的使用，其實對基本培養(yǎng)基的構成和培養(yǎng)條件（溫度、光照、濕度、PH等）都屬于配方的范疇。在這方面的調整主要是根據(jù)實際培養(yǎng)狀況靈活調整。在生根階段，試驗證明培養(yǎng)基高滲透勢或液體培養(yǎng)基有利于營養(yǎng)素和激素的運轉，有利于根的發(fā)生和形成，因此大部分植物在生根過程需要調整基本培養(yǎng)基的組成。但具體需不需要應該通過對比試驗確定。

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什么是濾紙橋生根？

濾紙橋生根技術是分化苗直接瓶外生根技術，其作用主要是簡化生根環(huán)節(jié)，提高煉苗成活率，降低組培成本，同時還可以對污染苗進行最大程度的利用。

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人工種芽的形成標志是什么，怎樣才能算是一個完整的人工種芽？

一個完整的人工種子是由體細胞胚、人工胚乳和人工種皮三部分組成。

它的優(yōu)勢在于：

1、培養(yǎng)條件可以人為控制，省地省工，可直接播種。

2、人工種子制作時，可加入營養(yǎng)物質、植物生長調節(jié)劑、固氮菌、殺蟲劑等。

3、以用于生產人工種子的體細胞胚，可以利用生物反應器大規(guī)模生產，效率極高。

4、一些珍貴種苗或樹種可以通過人工種子，加速其生產應用。

存在問題：

1、并非所有植物都能培育出大量高質量的體細胞胚。

2、目前的人工胚乳和種皮還不夠理想，不能有效防止微生物的腐蝕。

3、人工種子的貯藏問題有待于進一步完善。

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在組培中胚狀體在外部形態(tài)上是如何與愈傷組織區(qū)別的？

大量實驗證實，植物體細胞具有成胚的潛力，由體細胞形成的胚狀體叫體細胞胚。一般情況，體細胞組織形成愈傷組織之后3周內，在愈傷組織上出現(xiàn)大量胚，這些胚是由愈傷組織外層細胞以及深部細胞起源的。在離體或活體條件下，體細胞經原胚期、球形胚期、心形胚期、魚雷胚期和子葉期等階段形成的胚叫體細胞胚狀體。從外植體或愈傷組織表面產生胚狀體的情況較為常見。

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從愈傷組織向球形胚過渡的標志是細胞的活躍分裂形成一團致密的沒有表皮層的細胞團結構，可以明顯地與疏松的愈傷組織區(qū)分開。

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鑒別胚狀體的標準：

1、胚狀體具有極性，也就是說胚狀體在發(fā)育的早期階段，在其相反的兩端分化，分別出現(xiàn)莖端和根端，是一種單極性結構。

2、在組織學上，胚狀體的維管組織與母體植物或外植體的維管組織一般沒有聯(lián)系，

其維管組織的分布呈“Y”字形。而根或芽的分化，里面長出原形成層束，與愈傷組織形成的或外植體中的維管組織往往相連。

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如果在配制母液時，將大量元素和微量元素參在同一個罐子內，會對植物有影響嗎？

母液配制，主要是考慮到母液穩(wěn)定性問題，根據(jù)化學反應原理，濃度很高的大量元素中的陰離子，對微量元素的金屬離子來說是過量的，因此若混在一起，微量元素中的金屬離子會很容易發(fā)生水解反應，生成沉淀，從而失效。長時間使用這樣的母液，就會發(fā)生生理病害，比如缺素癥（黃葉，葉不展，萎縮變脆等）。建議使用干粉式培養(yǎng)基。

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植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基為什么只用蔗糖而不用葡萄糖？為什么動物培養(yǎng)的培養(yǎng)液中用葡萄糖而不用蔗糖？

這個問題應該從植物與動物的生理機制去思考。植物與動物的最大差別就是植物是自養(yǎng)型的（光合作用），而動物是異養(yǎng)型的（外部吸收代謝）。植物光合產物是多糖（二碳糖以上，包括蔗糖），貯藏產物形式是淀粉，而淀粉的合成前體就是蔗糖。蔗糖＝葡萄糖＋果糖，所以蔗糖的合成必須同時要有葡萄糖和果糖，其實植物也只能吸收葡萄糖和果糖。

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在組織培養(yǎng)中加入蔗糖，經熬煮和高壓滅菌后就會分解成植物能夠吸收的葡萄糖和果糖形式。其實這樣看來在組培中，植物也有部分異養(yǎng)的特點，如果在培養(yǎng)基中缺少任何一種糖的形式，植物在自養(yǎng)能力（光合，呼吸，產物代謝等）較差的情況下，就難免會影響其生理代謝。與植物不同的，動物是異養(yǎng)型的他不需要淀粉的積累，也沒光合作用，動物細胞本身所處的生理環(huán)境和代謝方式就決定了它對糖形式的要求了。

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如何利用組培技術培養(yǎng)一棵未知植物？

作為未知植物的組培，應該歸為珍稀植物材料的范疇。一是數(shù)量有限，二是不曾命名，三是無文獻可查。這種材料如果性狀優(yōu)良，進行組培快繁是相當必要的。一般可以通過以下步驟開展工作：

1、植物的生物學性狀，進行植物歸類和屬種劃分。

2、確定植物的繁殖方式（分蘗、種子、扦插、根莖等），比較組培繁殖的優(yōu)勢。

3、根據(jù)植物特性（頂端優(yōu)勢，萌蘗能力等）確定組培發(fā)生方式。

4、小量無菌外植體系的建立，確定高效外植體獲得方法。

5、大量外植體群體建立，誘導分化配方設計。

6、確定最好分化的繼代配方。

7、生根配方設計與確定。

8、試管苗出苗。

9、大田栽植，觀察組培苗生物學性狀，與母本比較鑒別，確定優(yōu)良性狀的遺傳穩(wěn)定性。

10、工廠化繁殖，市場化運作。

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在初代培養(yǎng)階段，成功地誘導出綠色的愈傷組織；進行繼代培養(yǎng)時愈傷組織增殖很快，卻始終沒有出芽，如何解決不產生不定芽的問題？

愈傷組織誘導成功后，如何有效地誘導出不定芽是相當重要的。外植體產生愈傷組織的時間和愈傷生長的程度，隨不同植物種類和培養(yǎng)條件有較大的差異。有些植物形成不定芽比較容易，能夠直接從外植體受傷的或沒有受傷的部位分化出不定芽。

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一般認為細胞分裂素/生長素的比值是控制器官發(fā)生的重要因素，調整他們的適當比值就可以有效的控制愈傷組織的芽、根等器官的分化。在此理論下，愈傷組織誘導不定芽的能力，與愈傷組織的狀態(tài)密切相關，能夠誘導形成分生細胞團至關重要，分生細胞排列較為規(guī)律，較大的在外，越向內細胞越小，排列也越緊密，細胞質濃厚，核相對較大，這樣的分生細胞在激素比值調控的情況下，就很容易形成不定芽。這也就是為什么愈傷組織在繼代的時候要交替使用不同激素的原因。

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NAA和2，4-D哪個生長素促進愈傷誘導效果更好？

對于愈傷誘導和增殖來說，2，4－D效果要比NAA明顯；但有一個問題，很多情況下，2，4－D誘導的愈傷比較難以再生芽。

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滅完菌，凝固好的培養(yǎng)基上面會有一層水是什么原因？如果將植物材料轉接于這樣的培養(yǎng)基中，會有什么后果？

培養(yǎng)基滅過菌后或多或少會有積水現(xiàn)象，一般來說冬天要輕一些。如果積水太多接種的時候倒出來，不然容易造成容器壁水珠比較多，影響光照，從而造成玻璃化現(xiàn)象加重。

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在組培中，葉片較易脫落，是什么原因引起的呢？

葉片脫落是對逆境的一種表現(xiàn)，溫度過高、透氣不良、培養(yǎng)物過于密集、久不轉移、有害氣體積累（乙烯、氨氣、甲醛）等會引起植物材料的落葉或黃化。

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空白培養(yǎng)是什么意思？

空白培養(yǎng)在高效外植體系的建立方面是很有用的步驟。空白培養(yǎng)就是不加任何激素的培養(yǎng)過程。對于外植體迅速適應瓶內環(huán)境和有效外植體群體的建立是很有用的。

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如果芽體只是長高，不膨大也不分化，有的靜止不動，請問這會是什么原因引起的呢?

成活外植體如何成功啟動是組培過程中至關重要的環(huán)節(jié)之一。由于大田植物材料其激素水平和細胞活性差距較大，如何迅速將外植體對培養(yǎng)基條件做出反應也有很多方法，首先芽體萌發(fā)時應用赤霉素，黑暗培養(yǎng)，高低激素配合使用等都會起到很好的效果。

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用幼芽啟動用于分化芽的愈傷，NAA與6-BA的比例有一般規(guī)律嗎？還有用2，4-D啟動的愈傷再轉到只含NAA和6-BA的培養(yǎng)基中，愈傷變?yōu)榫G色，有分化的可能嗎？

離體的愈傷組織是一種正在增生的非組織化的細胞群，可以從幾乎任何類型的植株獲得。由外植體形成愈傷組織很少是自發(fā)的，它代表創(chuàng)傷反應的擴展，一般要求在培養(yǎng)基中有生長素，常常還要求有細胞分裂素同時存在。最有效地產生愈傷組織的激素濃度隨所用的植物及器官而異，但其比外植體直接誘導苗所需的濃度要高。

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大多數(shù)植物中愈傷組織可從外植體上分離開，并可進行繼代培養(yǎng)和連續(xù)繁殖，所使用的培養(yǎng)基中所含的激素水平，與用于誘導愈傷組織時相同。如果降低激素水平，或適當調節(jié)生長素對細胞分裂素的比例，某些愈傷組織將再生出苗或胚。

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洋蔥也能加在培養(yǎng)基中？能說說它的機理嗎？

培養(yǎng)基中添加有機附加物，如馬鈴薯、香蕉、椰汁等，主要是由于他們含有豐富的糖、蛋白質、各種無機鹽、維生素以及各種活性物質。洋蔥也不例外，除了含有豐富的營養(yǎng)物質之外，洋蔥還含有豐富的硫化合物，是強有力的抗菌成分，能殺死多種細菌。

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在壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，會有黃葉出現(xiàn)，葉子都枯了。是什么原因引起的?

組培苗的黃化是由培養(yǎng)基成分、環(huán)境、激素、碳水化合物等各種因素引起的，但這樣的解釋是比較抽象的。我覺得在壯苗生根階段，由于培養(yǎng)基的變化，特別是激素的改變導致培養(yǎng)基高壓滅菌后PH變化與分化階段是有較大差別的，加之苗子與培養(yǎng)基接觸面積的變小，營養(yǎng)供應滯后。所以當根長出來以后，會有不同程度的改變。如果解決的話，還應該確定一下生根培養(yǎng)基高壓滅菌后的pH變化，進行適當調整，同時在分化時進行適當壯苗調整也是比較好的方法。

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1、接種前，接種工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精濃度是75%還是95%？

2、用新鐵炮百合鱗片作外植體，對鱗片切割有沒有什么方法可以減少污染，書上講根據(jù)極性方向接種到培養(yǎng)基上，怎么判斷極性呢？

3、使用玻璃瓶和不銹鋼的蓋子作為培養(yǎng)容器，透氣性是不是不好，會影響培養(yǎng)效果嗎？

接種工具接種灼燒前浸泡酒精的濃度，可以是75%也可以是95%的。至于極性指的就是植物材料有趨向發(fā)育的特征。比如是莖繁，靠近莖頂端發(fā)出芽子，遠離莖頂端會長出根。是根繁的話，新芽發(fā)生于近心端，新根發(fā)生于遠心端。因此在接種時，盡量不要使材料倒置，盡量保持植物的極性方位，不能將莖端插入培養(yǎng)基內。培養(yǎng)容器的透氣性是決定瓶內濕度和氣體狀況的主要因素，因此如果過于密封，使瓶內外得不到氣體交換，就會不同程度的受到影響。建議使用透氣性好的培養(yǎng)容器。

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生化培養(yǎng)箱可以進行植物組織培養(yǎng)嗎？它與光照培養(yǎng)箱有什么不同？

光照培養(yǎng)箱主要是模擬植物的光照條件，更適合植物的培養(yǎng)、種子發(fā)芽等的實驗，而生化培養(yǎng)箱更偏重于溫度、濕度的控制，微生物實驗等比較合適。

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高壓滅菌后培養(yǎng)基的pH會變大還是變??？MS和1/2MS哪種培養(yǎng)基pH變化更大？

培養(yǎng)基滅菌后pH會降低0.2左右，其主要原因就是有機物的分解，特別是維生素、氨基酸和糖，因此MS會比1/2MS培養(yǎng)基pH變化更大。

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內生菌造成的污染在外觀上怎么辨別？

內生菌是指在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官的細胞間隙或細胞內的細菌，可通過組織學方法或從嚴格表面消毒的植物組織中分離或從植物組織內直接產生擴增出微生物DNA的方法來證明其內生。在植物組織培養(yǎng)中，由于材料內部的內生細菌不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料帶入培養(yǎng)過程，從而引起的污染稱為內生細菌污染。從污染狀態(tài)來看，是發(fā)生于植物材料周圍，一般會由培養(yǎng)基內向外延展，并且發(fā)生的時間也會比接觸性污染要長，接觸性的細菌一般在2－4天表現(xiàn)，內生菌則會超過4天，并且菌的種類也相對單一。

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水解酪蛋白有酸水解，有酶水解，在使用過程中有沒有區(qū)別，他們的在培養(yǎng)基中的作用是一樣的嗎？

水解酪蛋白（CH）和水解乳蛋白（LH）是多種氨基酸的混合物，對胚狀體、不定芽的分化有良好的促進作用，通常用量在500mg/L，特別是當有高水平IAA存在時更是如此。對于酪蛋白不管是酸解還是酶解，作用都是一樣的，但考慮到組培苗的異養(yǎng)功能，酸解應該更有利于發(fā)揮其作用。

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有些樹種受傷后會分泌出一些白色的漿液，比如梓葉槭，不管是莖段還是葉片，只要有傷口的地方都會有漿液，而這會加重外植體的褐化，請問應該怎么處理呢？

這是植物的傷流現(xiàn)象。由于傷流液中含有酚類物質，因此在培養(yǎng)中極易引起褐變。許多研究表明，選擇適當?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件是克服褐變的最主要手段。通常外植體應有較強的分生能力，在最適宜的細胞脫分化和再分化培養(yǎng)條件下，使外植體處于旺盛的生長狀態(tài)，便可大大減輕褐變。適宜的溫度和在全黑暗條件下進行培養(yǎng)也可顯著減小外植體的褐變。液體培養(yǎng)和連續(xù)轉接也是很好的措施。

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另外，加入一些氧化劑或用抗氧化劑進行材料（外植體）的預處理或預培養(yǎng)，可大大減輕醌類物質的毒害。這些抗氧化劑包括：VC、檸檬酸、硫代硫酸鈉等。此外，0.1％-0.5％活性炭對吸附酚類氧化物的效果也很明顯。

組培室常用的培養(yǎng)基及其配置

MS培養(yǎng)基

MS培養(yǎng)基是目前使用最普遍的培養(yǎng)基。其具有較高的無機鹽濃度，能夠保證組織生長所需的礦質營養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存和消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不會影響離子間的平衡。MS固體培養(yǎng)基可用于誘導愈傷組織，也可用于胚、莖段、莖尖及花藥的培養(yǎng)，其液體培養(yǎng)基用于細胞懸浮培養(yǎng)時能獲得明顯的成功。MS培養(yǎng)基的無機養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細胞在營養(yǎng)上和生理上的需要。因此，一般情況下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機附加成分。和其它培養(yǎng)基的基本成分相比，MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的顯著特點。

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B5培養(yǎng)基

與其他培養(yǎng)基相比，它的主要特點是含有較低的銨，而銨這一營養(yǎng)成分可能對有些培養(yǎng)基有抑制生長的作用。當愈傷組織和懸浮培養(yǎng)中對B5培養(yǎng)基與MS培養(yǎng)基進行對比培養(yǎng)試驗時，發(fā)現(xiàn)有些植物的愈傷組織和細胞培養(yǎng)物在MS培養(yǎng)基上生長得好，有些在B5培養(yǎng)基上生長得更適宜。

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N6培養(yǎng)基

為水稻的花藥培養(yǎng)設計，成分簡單，硝酸銨含量高，不含鉬，用于花藥(谷物)培養(yǎng)。

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White培養(yǎng)基

為培養(yǎng)番茄根尖培養(yǎng)設計，無機鹽濃度低，屬于低鹽培養(yǎng)基。適用于生根培養(yǎng)，成熟胚胎培養(yǎng)，后作了改良，多用于本草植物。

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常用培養(yǎng)基母液成分及配置過程

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培養(yǎng)基母液的各種成分包括大量元素、微量元素、Fe鹽、有機成分、肌醇、激素等。

大量元素母液的配制(10X，1 L)

微量元素母液的配置(100X,0.5 L)

Fe鹽母液的配置(100X,0.2 L)?

有機成分母液的配置(100X，200ml，無肌醇)

肌醇母液配置(100X,200ml)?

激素母液的配置

注意事項?

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配制大量元素母液時，某些無機成分如Ca2+、SO42-、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學反應，產生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應注意先后順序。特別應將Ca2+、SO42-、Mg2+和H2PO4-等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。CaCl2·2H2O要在最后單獨加入，在溶解CaCl2·2H2O時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時要防止其溢出。

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使用電子分析天平時注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球將天平內的臟物清理干凈。

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在配制鐵鹽時，如果加熱攪拌時間過短，會造成FeS04和Na2-EDTA鰲合不徹底，此時若將其冷藏，F(xiàn)eSO4會結晶析。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eSO4和Na2-EDTA應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。

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由于維生素母液營養(yǎng)豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。

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所有的母液都應保存好，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團則不能繼續(xù)使用。

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計算時，要考慮周全，無論是配置母液時的計算還是配置培養(yǎng)基時吸取量的計算，都要考慮周全，尤其是母液配置時的計算，因為貫穿以后的實驗，必須準確制備。

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