Cell Counting Kit-8，簡稱CCK-8試劑盒或CCK8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。

?WST-8檢測原理圖（EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑）

本試劑盒可用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。

使用注意事項

Q：為什么測出的吸光度數值較低？

1.細胞數量過低?？梢赃m當增加細胞待測數量。

2.染色難度大，建議增加CCK-8孵育時間。

Q：為什么數據重復性差？

1.孔板最外圈試劑容易揮發(fā)，建議最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。

可以使用NEST的 Edge96孔板避免。

2.CCK-8沾壁，建議加入CCK-8后，輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。

3.細胞數量過多或過少，建議預先在1000-100000個/孔范圍內摸索條件。

4.孔內氣泡干擾酶標儀檢測，檢測前需確保每個孔內無氣泡。

Q：在做細胞的加藥實驗時,藥物對CCK-8測定是否有影響？

1.注意如果藥物具有還原性(如維生素C),會和CCK-8發(fā)生顯色反應,增加吸光度。

2.藥物中的金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%, 90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。

解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。

3.由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應的物質,在正式實驗之前,建議使用一個孔作一下檢測,有必要先確認培養(yǎng)基和CCK-8是否反應，一般正常的OD值應該在0.4以下。

Q：可否采用CCK-8法進行藥物的IC50檢測？

可以,將細胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理一定時間后進行CCK-8檢測,根據吸光度繪制曲線,計算該藥物抑制細胞數量一半時的濃度(IC50)。

Q：CCK-8對于不同的細胞,靈敏度是否一樣？

不一樣,懸浮細胞較貼壁細胞難染色。對于貼壁細胞,一般加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時吸光度已經很高,但對于懸浮細胞則可能吸光度較低,可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。

Q：若是暫不檢測OD值，該如何處理？

若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。

Q：用CCK-8測細胞活力時每次都要做標準曲線嗎？
建議每次做，雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。