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酵母文庫/酵母雙雜交篩選/轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)小麥面包品質(zhì)的調(diào)控機(jī)制

2022-08-29 09:09 作者:上海歐易生物  | 我要投稿

前言


普通小麥(Triticum aestivum L.)是一種具有獨(dú)特加工品質(zhì)的重要糧食作物。其獨(dú)特的加工質(zhì)量來源于小麥種子貯藏蛋白(SSPs),包括麥膠蛋白和谷氨酸蛋白(即谷蛋白),其中麥膠蛋白可以增強(qiáng)面團(tuán)的粘性,而谷蛋白可以增強(qiáng)面團(tuán)的彈性。SSP含量(即籽粒蛋白質(zhì)含量;GPC)和組成是影響小麥加工質(zhì)量的關(guān)鍵因素,從而影響小麥價(jià)格。因此,闡明介導(dǎo)SSP合成的機(jī)制是有必要的。


小麥谷蛋白由高分子量谷蛋白亞基(HMW-GS)和低分子量谷蛋白亞基(LMW-GS)組成,小麥SPA(storage protein activator)蛋白可以激活小麥HMW-GS和LMW-GS相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)SSP積累。而小麥SPR(storage protein repressor)蛋白,屬于NAC家族的TF,可以抑制SSP蛋白積累。


2022年7月,四川農(nóng)業(yè)大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在International Journal of Molecular Sciences上發(fā)表了題為“The Q Allele Increases Wheat Bread-Making Quality by Regulating SPA and SPR”的研究論文,該研究發(fā)現(xiàn)了一個(gè)由錯(cuò)義突變產(chǎn)生的新的Q等位基因Q,通過性狀分離觀察發(fā)現(xiàn)單基因座的突變,影響了小麥穗密度和株高等性狀,通過酵母雙雜交篩選和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)Q可以影響Q蛋白與SPA間的相互作用,并通過抑制SPR表達(dá)增加小麥SSP蛋白積累,提高面包品質(zhì)。



本研究作者通過對(duì)比野生型小麥和普通小麥突變株系,發(fā)現(xiàn)突變株較野生型小麥矮、穗密度更高,但穗數(shù)、粒數(shù)、分蘗數(shù)沒有顯著差異。通過F2代分離比以及與突變體比較等,發(fā)現(xiàn)突變性狀是由單基因座Cp5控制的。通過對(duì)的Q 基因克隆,序列比對(duì)和表達(dá)分析,發(fā)現(xiàn)在miRNA172結(jié)合區(qū)位點(diǎn)附近存在1個(gè)錯(cuò)義突變,產(chǎn)生的新的Q等位基因被命名為Q,且表達(dá)量高于野生型中的Q等位基因。對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),相比Q蛋白,Q存在更多的氨基酸殘基,可以在改變區(qū)域形成一個(gè)α-螺旋。


為了確定Q是否影響小麥加工質(zhì)量,研究者比較了和WT的質(zhì)量相關(guān)參數(shù),發(fā)現(xiàn)的GPC值、濕面筋含量和Zeleny沉降值均高于WT,粒型小于WT,的平均面包體積比WT大20%等。


為闡明Q基因?qū)π←溍姘焚|(zhì)影響的機(jī)制,研究者以Q蛋白為誘餌通過酵母雜交篩選開花后14天小麥種子文庫,結(jié)果共篩選到6個(gè)與Q蛋白互作的轉(zhuǎn)錄因子,其中1個(gè)為SPA。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),Q與SPA間的相互作用弱于Q蛋白與SPA的互作強(qiáng)度,且Q到Q的突變?cè)鰪?qiáng)了SPA對(duì)LMW-GS基因表達(dá)的激活作用。


此外,通過分析和 WT的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)SPR表達(dá)量在兩個(gè)樣本間存在顯著差異,說明Q蛋白通過調(diào)節(jié)SPR的表達(dá)來調(diào)控SSP基因的表達(dá),通過qRT-PCR對(duì)此進(jìn)行了驗(yàn)證。


Q等位基因?qū)π←溞誀罴懊姘焚|(zhì)的影響


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