細胞的專業(yè)死法，你知道多少？實驗中的常用檢測指標你知道嗎？
最近，各種各樣的細胞程序性死亡相關(guān)的文章真的如雨后春筍，隨便選一個一設(shè)計就能出一篇分值不低的文章，小薇之前也分享過不少文獻。今天小薇想給大家整理一下比較火的細胞程序性死亡，以及相關(guān)的實驗檢測指標。
細胞凋亡（Apoptosis）
細胞凋亡是一種程序性細胞死亡方式，是一種高度規(guī)則化的過程，通常是細胞體內(nèi)出現(xiàn)DNA斷裂，表現(xiàn)為細胞體積縮小、細胞核凝固和DNA碎片化，最終導(dǎo)致細胞完全消失。這個過程的發(fā)生受到一些內(nèi)外因素的調(diào)控，包括各種信號通路、結(jié)構(gòu)蛋白、酶以及許多其他的分子。在正常細胞周期中，凋亡可以去除不需要或有潛在危害的細胞，例如自然免疫系統(tǒng)清除被癌細胞識別出來的生物，另外還可以作為正常細胞發(fā)育過程中某些器官和組織細胞數(shù)量調(diào)節(jié)機制的重要部分。
細胞凋亡設(shè)計實驗可以通過多種方法來檢測，以下是幾個比較常見的細胞凋亡檢測指標：
DNA斷裂：由于在細胞凋亡過程中，DNA被分解成片段，所以可以通過凝膠電泳等方法檢測DNA斷裂的長度和數(shù)量以確定細胞是否死亡。
細胞膜變化：細胞凋亡時，細胞膜上會出現(xiàn)磷脂外翻的情況，可以用熒光染料如AnnexinV-FITC/PI染色法，或使用ANNEXIN V-APC/7AAD染色法來檢測。
內(nèi)部的酶活性：由于在細胞凋亡過程中，細胞內(nèi)某些酶的活性增加，如半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3），可以使用Caspase-3染色法來進行檢測。
蛋白質(zhì)的表達：在細胞凋亡過程中，許多蛋白質(zhì)表達發(fā)生變化，如Bcl-2、Bax 、P53等可通過Western blotting, ELISA等方法檢測蛋白的表達量。
壞死性凋亡（Necroptosis）
壞死性凋亡是一種細胞死亡的過程，主要由細胞因子、受體和核酸感受器等介導(dǎo)起始過程，進而導(dǎo)致細胞死亡。在壞死性凋亡過程中，受體相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受體相互作用蛋白激酶3（RIPK3）和底物混合譜系激酶樣蛋白（MLKL）參與壞死性凋亡的發(fā)生，其中MLKL是關(guān)鍵分子。
常用的檢測指標有：
細胞形態(tài)學(xué)觀察：通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化，如細胞體積縮小、凝聚或破碎等現(xiàn)象。
內(nèi)部的酶活性：在壞死性凋亡過程中，細胞內(nèi)某些酶的活性增加，如混合譜系激酶（MLKL），可以使用MLKL染色法來進行檢測。
蛋白質(zhì)表達：在壞死性凋亡過程中，許多蛋白質(zhì)表達發(fā)生變化，如Caspase-8、BID等?？梢允褂肳estern blotting等方法檢測蛋白的表達量。
細胞焦亡（Pyroptosis）
細胞焦亡（Pyroptosis）是一種由gasdermin介導(dǎo)的程序性細胞死亡形式，表現(xiàn)為細胞持續(xù)擴張直至細胞膜破裂，導(dǎo)致細胞內(nèi)容物釋放，從而激活強烈的炎癥和免疫反應(yīng)，可通過以下指標進行檢測：
細胞形態(tài)學(xué)觀察：細胞焦亡常常表現(xiàn)為細胞持續(xù)擴張直至細胞膜破裂，因此可以通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)的變化。
炎癥小體相關(guān)蛋白：炎癥小體在細胞焦亡中扮演重要角色，因此可以檢測NLRP3、ASC等炎癥小體相關(guān)蛋白的表達水平。
Caspase-1活性：炎癥小體激活后會引起Caspase-1的激活，因此可以通過檢測Caspase-1活性來判斷細胞焦亡的發(fā)生。
Gasdermin D（GSDMD）：GSDMD是細胞焦亡執(zhí)行者蛋白，其剪切和多聚化會導(dǎo)致細胞穿孔，進而引起細胞死亡，因此可以檢測GSDMD的表達水平。
對于以上三種細胞程序性死亡，小伙伴們可以看一下這篇文獻（IF：9.685）：
自噬（Autophagy）
自噬（Autophagy）是一種細胞自我分解的過程，在這個過程中，細胞通過一系列機制，包括自噬囊泡的形成、合并和降解，將自身部分組成物質(zhì)進行分解和利用。
常用的檢測指標有：
LC3B：LC3B (Microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta) 是自噬過程中的關(guān)鍵蛋白，準確地反映自噬的情況。可以通過 Western blotting 和免疫熒光技術(shù)來檢測 LC3B 的表達。
p62：p62 (Sequestosome 1) 是一種與自噬通路相關(guān)的蛋白，可以在負責(zé)降解的自噬體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。Western blotting 是常用的檢測 p62 的方法。
Lysosome：自噬體通過融合到溶酶體中實現(xiàn)其降解，因此，通過檢測 Lysosome 及其活性可以了解細胞自噬的程度?？刹捎胊cridine orange染色、Lysosome tracker染色以及活性測定試劑盒等多種方法。
透射電子顯微鏡（TEM）觀察：TEM觀察樣品的超微結(jié)構(gòu)，可以直接看到自噬體的形成和降解過程。
參考文獻（IF：13.391）
今天先給大家介紹這四種，后面小薇會繼續(xù)介紹其他的死亡方式。
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