細胞劃痕實驗是目前測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的最常用也是最簡單的方法，基本原理是：在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕/傷口”，邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕/傷口”愈合。因其類似體外傷口愈合過程，又名傷口愈合實驗（Wound-Healing Assay），廣泛用于可以觀察藥物、基因等外源因素對細胞遷移和修復(fù)的影響。

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原理：如下圖所示：

細胞遷移動態(tài)圖（來自網(wǎng)絡(luò)）

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實驗過程

在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，然后再繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設(shè)定的時間（可有不同時間點），取出細胞培養(yǎng)板，顯微鏡下觀察周邊細胞是否遷至中央劃痕區(qū)，并拍照。

圖一劃痕實驗

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ImageJ分析細胞劃痕面積

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那么如何在ImageJ中實現(xiàn)上圖劃痕面積和傷口愈合百分比的分析呢？這時候ImageJ就可以派上大用場，ImageJ這個圖像分析大殺器，讓實驗結(jié)果所暗藏的規(guī)律清晰明了地呈現(xiàn)你的面前。

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我們只需統(tǒng)計劃痕面積（Scratch Area）隨著時間的變化率以及傷口愈合百分比（Wound healing percentage），即可對細胞的侵襲性了如指掌。下面看詳細步驟：

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步驟一

打開ImageJ軟件，其界面：File，Open，選擇待分析圖片（圖一），界面如下：

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步驟二

增強對比：Process，Enhance Contrast，出現(xiàn)如界面：

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勾上Normalize，Saturated?pixels：0.3%，點擊OK，效果如下：

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Process，Smooth（平滑），效果如下：

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Process，F(xiàn)ind Edges（尋找邊緣），效果如下：

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Image，Adjust，Threshold，閾值選定，選中為紅色，調(diào)節(jié)閾值為0—20。點擊Apply。

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效果如下：

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步驟四

選擇魔棒工具，魔棒工具位于下圖右下角：

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點擊黑色的劃痕部分，效果如下：

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點擊Analyze，Measure，結(jié)果如下，劃痕面積Area為43328平方像素。根據(jù)最開始的劃痕面積，跟某一時間愈合的那一部分面積（最開始面積-某時間點的面積）與最初面積的比值即可得到傷口愈合的百分比。

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由此我們得到了劃痕面積（Scratch Area）隨著時間的變化、傷口愈合百分比（Wound healing percentage），進行后續(xù)統(tǒng)計分析即可。

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ImageJ用來細胞共定位也非常的強大方便，下期我們講解，共同期待！

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