在用?艾美捷?Nanoprobes?Nanogold??標(biāo)記蛋白質(zhì)或其他分子后，它可以在聚丙烯酰胺凝膠上運(yùn)行。隨后，可以使用LI Silver或GoldEnhance?對(duì)其進(jìn)行顯影，以對(duì)含金條帶進(jìn)行特異性染色。該過(guò)程快速、靈敏且具有選擇性，只需幾分鐘即可形成密集染色。它也適用于轉(zhuǎn)移印跡。這可用于區(qū)分哪些組件標(biāo)有?Nanogold?

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LI Silver增強(qiáng)方案：使用?LI Silver?進(jìn)行凝膠染色輕松檢測(cè)凝膠和印跡上 的?Nanogold??標(biāo)記分子

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艾美捷?Nanoprobes?LI Silver增強(qiáng)方案特色：

1.銀增強(qiáng)劑凝膠染色：LI Silver

2.具體：僅開(kāi)發(fā)?Nanogold??標(biāo)記帶

3.快速：1-5分鐘

4.敏感：比通常的凝膠染色劑更敏感

5.可直接用于凝膠或印跡轉(zhuǎn)移

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1.4 nm Nanogold??粒子可以與銀一起顯影，使它們變得肉眼可見(jiàn)，從而將信號(hào)放大數(shù)千倍。如果您使用?monomaleimido-Nanogold、mono-NHS-Nanogold??或?mono-amino-Nanogold??標(biāo)記蛋白質(zhì)或其他分子，則可以使用銀增強(qiáng)劑在凝膠上輕松分析和檢測(cè)。

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以下是檢測(cè)凝膠或印跡上?艾美捷?Nanoprobes?Nanogold??標(biāo)記條帶的方案：

1.用?Nanogold??標(biāo)記后，通過(guò)柱層析、蔗糖梯度或其他純化方法去除未結(jié)合的金顆粒。在樣品中留下過(guò)量的游離?Nanogold??會(huì)干擾預(yù)期的凝膠染色。

2.像往常一樣運(yùn)行凝膠，有兩個(gè)預(yù)防措施：

A) Nanogold??會(huì)被 β-巰基乙醇（或?DTT）降解，因此樣品不得與還原劑混合，即必須運(yùn)行非還原凝膠。其他成分（SDS?等）的正常濃度是可以接受的。

B)?樣品不得加熱。上樣前，樣品經(jīng)常在?SDS?中煮沸。由于?Nanogold??在?50°C?以上會(huì)降解，因此不建議加熱。這通常不是限制，因?yàn)榇蠖鄶?shù)樣品無(wú)需加熱即可獲得正常的凝膠圖案。

3.如果需要，可以將凝膠電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素上，但這不是必需的。

4.用幾次去離子水沖洗凝膠。由于銀顯影劑會(huì)被鹵化物沉淀，因此必須去除痕量的?NaCl。

5.將凝膠或印跡置于合適的培養(yǎng)皿中，并涂上足夠的新鮮制備的?LI Silver（目錄號(hào)?2013）以覆蓋凝膠。LI?銀是通過(guò)混合等量的?A?和?B?組分制備的。不要使用與?LI Silver?完全不同的常用凝膠銀染劑，也不能有效地開(kāi)發(fā)?Nanogold?。

6.觀(guān)察應(yīng)該呈現(xiàn)棕黑色的帶的發(fā)展。未進(jìn)入凝膠的含金聚集體或少量游離金可能會(huì)產(chǎn)生背景染色。通常的開(kāi)發(fā)時(shí)間是?1-5?分鐘。較長(zhǎng)的顯影時(shí)間（> 30?分鐘）將導(dǎo)致僅由顯影劑進(jìn)行一些非特異性背景自成核染色。

7.當(dāng)達(dá)到最佳染色時(shí)，通過(guò)在去離子水中沖洗來(lái)停止顯影。最后的染色凝膠現(xiàn)在是永久記錄。

8.對(duì)于所有條帶的比較和可視化，運(yùn)行重復(fù)凝膠并用考馬斯藍(lán)或凝膠銀染色劑染色。

9.由于?Nanogold??顆粒的重量增加（約?15,000），Nanogold??標(biāo)記的分子在凝膠上的運(yùn)行通常高約?15,000 MW。因此，標(biāo)記和未標(biāo)記的分子被分開(kāi)，它們的比例可以通過(guò)顯示總蛋白質(zhì)含量的常用凝膠染色（考馬斯或凝膠銀染色）來(lái)估計(jì)。

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文獻(xiàn)參考：

1.Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, and D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

2，Wilkens, S. and Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

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Nanoprobes專(zhuān)注于免疫金標(biāo)記和免疫測(cè)定試驗(yàn)領(lǐng)域，為廣大科研機(jī)構(gòu)提供用于檢測(cè)生物分子的最靈敏的試劑和技術(shù)。艾美捷科技是Nanoprobes的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。