實驗方法?

• 場景前置性條件恐懼記憶測試?

包括３個 部分。①前置場景：即場景的提前接觸。將老年及成年小鼠各 １５ 只分別置于測試 盒內停留 ５ ｍｉｎ。 ②即刻電擊訓練：前置場 景２４ｈ后，將 小 鼠 置 于 同 一測試盒內，并在５ｓ內給予快速的足底電擊 （２ｓ， ０．７５ｍＡ），電擊結束后小鼠在測試盒內停留１ｍｉｎ 后放回飼養(yǎng)籠。③測 試：足 底 電 擊２４ｈ后，再 將 小 鼠置于同一測 試 盒 內 停 留３ｍｉｎ，測試其對該場景 的恐懼反應。在實驗過 程 中，取 Ｃ５７Ｂｌ６Ｊ野 生 型 老 年小鼠及成年小鼠各１５只，分別給予場景前置性條 件恐懼記憶測試；老年及成年小鼠各１５只，雌雄各 半，隨機分為兩組，實驗組（ｎ＝８）在場景前置前和即 刻電擊前２０ｍｉｎ分別給予４－ＡＰ（１ｍｇ／ｋｇ）急性腹 腔注射，對照組（ｎ＝７）則在相應的時間點給予等量 的生理鹽水腹腔注射，分別給予場景前置性條件恐懼記憶測試。

條件性恐懼實驗，型號：XR-XC404，上海欣軟

• 條件性場景恐懼記憶測試?

包括兩個部分。 ①訓練：將小鼠置于測試盒內，２ｍｉｎ后給予足底電 擊（２ｓ，０．７５ｍＡ），電擊結束后讓小鼠在測試盒內 停留３ｍｉｎ后放回飼養(yǎng)籠。②測試：３０ｍｉｎ及２４ｈ 后，將小鼠置于同一測試盒內，測試其對該場景的恐 懼反應。實驗過程中，取老年小鼠３０只，隨機分為兩 組。實驗前２０ｍｉｎ，實驗組（ｎ＝１５）給予４－ＡＰ（１ｍｇ／ ｋｇ）急性腹腔注射，對照組（ｎ＝１５）給予等量的生理鹽 水腹腔注射，分別進行條件性場景恐懼記憶測試。

• 條件性聲音恐懼記憶測試?

包括兩個部分。 ①訓練：將小鼠置于測試盒Ａ內，２min后給予聲音刺激（2800Ｈｚ，85ｄＢ，30ｓ），28s后給予足底電擊 （2s，0.75 ｍＡ），電擊與聲音 刺激同時結束。小鼠在測試盒內停留1min后放回飼養(yǎng)籠。② 測試： 30min及24h后，再將小鼠置于另一新的測試盒Ｂ內，2min后給予同樣的聲音刺激，聲音刺激持續(xù) 1min，測試其對該聲音的恐懼反應。實驗過程中， 取老年小鼠３０只，隨機分為兩組。實驗前20ｍｉｎ， 實驗組（ｎ＝１５）給 予 ４－ＡＰ（1mg／kg）急性腹腔注射，對照組（ｎ＝１５）給予等量的生理鹽水腹腔注射， 分別進行條件性聲音恐懼記憶測試。

檢測指標?

采用條件恐懼記憶測試系統及分析軟件（購自 上海欣軟，VisuTrack動物行為分析軟件），測試中自動記錄小鼠的僵直時間（小鼠對該場景有恐懼記憶，則會表現出自發(fā)活動減少或停止，一切自發(fā)活動停止的時間連 續(xù)超過１ｓ，稱為僵直時間）及總測試時間，采用僵直 時間占總測試時間的百分比（僵直時間％）來表示小鼠的恐懼程度，僵直時間長短與恐懼記憶的強弱呈 正比?；A僵直時間％：實驗開始時，在前置場景中，小鼠放入測試盒內，所測得其在該場景內的僵直 時間％；電擊后僵直時間％：對小鼠進行電擊后，所測 得的其在該場景內的即刻僵直時間％；３０min或２４ｈ后僵直時間％：３０min或２４ｈ后，再將小鼠置于同一 測試盒內，所測得的其在該場景內僵直時間％。

以前的研究表明，與場景前置性條件恐懼記憶 的形成絕對依賴于海馬不同，傳統的條件性場景及 聲音恐懼記憶的形成依賴于海馬及杏仁核神經環(huán)路，海馬受損時仍可依賴杏仁核的功能來形成 完整的對特定場景的恐懼記憶。依據這一特點，本文觀察了老年小鼠條件性場景及聲音恐懼記憶能力，結果顯示，老年小鼠的基礎僵直時間％、30min后以及24h后僵直時間％比較差異有顯著性，說明 老年小鼠無條件性場景及聲音恐懼記憶障礙。同時，本文結果還顯示，腹腔注射４－ＡＰ對老年小鼠條件性場景及聲音兩種形式的短期恐懼記憶（30min后僵直時間％）及長期恐懼記憶 （24ｈ后僵直時間％）均無影響。說明老年小鼠可以依賴杏仁核來 完成對傳統的條件場景及聲音恐懼記憶，隨著年齡 的增加海馬受損對該記憶的形成無影響；并且４－ＡＰ對老年小鼠這兩種場景記憶的形成無作用。

如果您也對動物神經科學與行為學實驗感興趣，可以關注我們：腦聲常談。