2.2.2 動物細胞融合技術與單克隆抗體

一、動物細胞融合技術與單克隆抗體

1.動物細胞融合技術

（1）細胞融合定義：兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程也稱細胞雜交。

（2）原理：細胞膜的流動性。

（3）誘導方法：PEG融合法（聚乙二醇）、電融合法和滅活病毒誘導法等

（4）意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。

（5）應用：單克隆抗體

植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較

2.單克隆抗體

（1）含義：

抗體是由B淋巴細胞轉化而來的漿細胞分泌的，每個B淋巴細胞株只能產生一種專有的、針對一種特異性抗原決定族的抗體。這種從一株單一細胞系產生的抗體就叫做單克隆抗體（McAb），簡稱單抗。

（2）原理：一種B淋巴細胞在抗原的刺激下，只能產生一種針對這種抗原的特異性抗體。

骨髓瘤細胞能夠無限增殖，B淋巴細胞與其融合后形成的雜交瘤細胞既能迅速大量增殖，又能產生單一抗體。

（3）培養(yǎng)

用96孔板培養(yǎng)和篩選，將細胞培養(yǎng)液通過稀釋，實現盡量每個孔只接種一個雜交瘤細胞，克隆化培養(yǎng)后，提取上清液，加入特定抗原，觀察抗原抗體特異性反應，若呈陽性，則為需要的雜交瘤細胞。

1）技術手段:動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合等。?

2）單克隆抗體的優(yōu)點:特異性強、靈敏度高、可大量制備。?

3）單克隆抗體的應用?

①作為診斷試劑;?

②用于治療疾病和運載藥物:如用單克隆抗體運載抗癌藥物，制成“生物導彈” 靶向治療腫瘤。?

二、動物體細胞核移植技術和克隆動物

1.定義

動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。

2.原理

動物細胞核的全能性。

3.種類

哺乳動物核移植可分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植。

4.過程

（2）生物（特別是高等動物）的克隆需要的基本條件：

①具有包含物種完整基因組的細胞核的活細胞（如乳腺上皮細胞）。

②能有效調控細胞核發(fā)育的細胞質物質（如去核卵的細胞質）。

③完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件（如誘導核-質重組細胞生長、分

化的實驗條件和懷胎母體的子宮環(huán)境）。

5.應用前景及存在的問題

（1）應用：

①加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育。

②保護瀕危物種。

③醫(yī)藥衛(wèi)生方面：

轉基因克隆動物作為生物反應器生產醫(yī)用蛋白；轉基因克隆動物細胞、組織作為異種移植的供體，用于人類疾病的治療；人的核移植胚胎干細胞經誘導分化，形成相應組織、器官，可用于組織器官的移植。

（2）問題

成功率低，產下的活克隆動物占移植克隆胚胎的比率平均不到10%；絕大多數克隆動物存在健康問題，許多表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大、異常肥胖、發(fā)育困難、臟器缺陷、免疫失調等；對克隆動物食品的安全性問題存在爭議。