現(xiàn)如今，從生物石油到藥品、醫(yī)療等各方各面，均與生命科學(xué)息息相關(guān)。而細(xì)胞培養(yǎng)是當(dāng)前整個(gè)生命科學(xué)研究中最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。干細(xì)胞生物學(xué)和疫苗研發(fā)等領(lǐng)域的發(fā)展及其應(yīng)用在很大程度上是基于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展。

細(xì)胞培養(yǎng)是將組織或原代外植塊的細(xì)胞分散開來，使呈細(xì)胞懸液，然后將其培養(yǎng)于固體基質(zhì)上貼壁生長，或使其在培養(yǎng)基中懸浮生長。細(xì)胞株是生命科學(xué)研究的重要材料，而零污染的細(xì)胞株更是獲得可靠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的前提。

由于細(xì)胞株是在模擬體內(nèi)生理環(huán)境等的特定體外條件下進(jìn)行生長，但又缺乏機(jī)體的免疫系統(tǒng)等機(jī)制，因此細(xì)胞培養(yǎng)工作不僅需要完善的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和技術(shù)方法，成敗的關(guān)鍵還在于能否保持無菌狀態(tài)、戰(zhàn)勝多種污染源帶來的挑戰(zhàn)。這就要求細(xì)胞培養(yǎng)操作者不僅要清除細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)潛在的污染物，還要掌握對(duì)應(yīng)的控制措施。

細(xì)胞株的微生物污染源一般有細(xì)菌、真菌、支原體。其中，支原體的大小為 0.1~0.3μm,相比于細(xì)菌和真菌在污染細(xì)胞培養(yǎng)物后會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基變色且鏡下可以觀察到菌體,支原體在普通的光學(xué)顯微鏡下不容易被觀察到，并且可穿過絕大部分的濾膜，因其沒有細(xì)胞壁，作用于細(xì)胞壁的抗生素對(duì)它無效。

細(xì)胞株一旦感染支原體后，培養(yǎng)基通常不會(huì)有顏色變化。支原體附著在細(xì)胞株表面，通過搶奪細(xì)胞培養(yǎng)基中的養(yǎng)分實(shí)現(xiàn)增殖。在其繁殖的過程中除了消耗培養(yǎng)基中的各種養(yǎng)分，同時(shí)還會(huì)改變培養(yǎng)基中的pH值，甚至產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞株有毒害的代謝產(chǎn)物，從而導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)的改變。因此可以看出支原體的存在會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞的表達(dá)、功能、生長、胞內(nèi)細(xì)胞器、代謝等方面產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響，嚴(yán)重影響培養(yǎng)細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)的準(zhǔn)確度，甚至?xí)?dǎo)致細(xì)胞株死亡。

實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條下被多種支原體同時(shí)污染的情況屢見不鮮，這是一個(gè)讓大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都十分頭痛的問題。保持無菌狀態(tài)，無論對(duì)于新手亦或是老手，都是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏免疫系統(tǒng)，因此，控制污染的方式是預(yù)防污染！

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，潛在的污染途徑主要包括操作技術(shù)和環(huán)境，其中環(huán)境因素又包括了無菌試劑和材料、層流超凈工作臺(tái)、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、水浴鍋和冰箱等。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的消毒流程是：1.用消毒酒精擦拭臺(tái)面；2.打開超凈工作臺(tái)和細(xì)胞房的紫外燈，照射1~2h。值得注意的是，紫外燈開啟后，人不能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，紫外線對(duì)眼睛和裸露的皮膚均有危害。若要進(jìn)入，操作人員一定要先關(guān)閉紫外燈，待人離開后再重新打開。

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