細胞體外培養(yǎng)過程中， 常見的污染包括細菌污染、霉菌 污染及支原體污染， 還有細胞間的交叉污染。細菌和霉菌污染在顯微鏡下甚至是肉眼就很容易識別。細菌污染時， 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液變酸、變渾濁， 顯微鏡下， 細胞間大量活躍運動的細小顆粒， 細胞大量死亡。 霉菌污染時， 嚴重時可見霉菌團塊， 漂浮在培養(yǎng)液中， 顯微鏡下可見不同形態(tài)的霉菌菌絲。只有支原體污染， 較難識別。常常對培養(yǎng)細胞的支原體的污染估計不足或被忽略。

支原體污染的潛在途徑包括：

1、受污染的培養(yǎng)基、試劑或儀器

2、實驗室人員（約?80.6 %的技術人員為支原體攜帶者）

3、其他實驗室的被感染培養(yǎng)物

支原體的污染來源

（1）細胞之間交叉污染；

（2）細胞培養(yǎng)操作人員的口腔、皮膚等；

（3）工作環(huán)境或實驗器材的污染；

（4）培養(yǎng)基的污染。

支原體檢測的方法主要有培養(yǎng)法、熒光法、電子顯微鏡法和聚合酶鏈反應( PCR) 法。美國食品和藥品管理局( FDA) 及歐洲要求必須進行培 養(yǎng)法及利用指示細胞進行的 DNA 熒光法的檢測。 這兩種方 法特異性和敏感性都很好， 但實驗周期太長。 抗體熒光法準 確性不夠。 PCR 法以其準確、快速及操作方便， 作為篩選方 法已被越來越多的實驗室使用， 培養(yǎng)法可作為后備。

在科學研究和開發(fā)研究中， 避免支原體污染及減少支原 體污染對科研、開發(fā)工作影響的最好方法就是定期對培養(yǎng)的 細胞進行支原體檢測 。 這種常規(guī)支原體檢測可最大限度降 低支原體污染， 確保排除未知支原體與細胞相互作用而產生 的嚴重后果。 尤其是在研究領域， 常忽視培養(yǎng)細胞中支原體 的污染， 或對支原體污染程度估計不足。 迫切需要提高認 識， 加強對培養(yǎng)細胞支原體污染的檢測。

在日常細胞培養(yǎng)工作中可采用以下幾點來控制支原體 的污染問題：

1 .從可靠來源引進、使用細胞， 特別是知名的信譽良好 的專門機構， 如 ATCC 、基礎醫(yī)學細胞中心等， 這些機構對細 胞質量進行一系列檢測。

2 .預防為主：細胞培養(yǎng)實驗室應制定嚴格的管理制度， 按照規(guī)范的實驗程序操作。 特別提醒一般實驗室可從戴口 罩、帽子做起。

3 .定期對實驗室中的培養(yǎng)物進行支原體檢測。 這也是 國外一些重要實驗室的經驗。 一旦發(fā)現(xiàn)已經污染支原體的 培養(yǎng)物， 滅活后棄之。 更換新的培養(yǎng)物。 避免支原體的進一 步播散。

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