BODIPY TR-Ceramide,紅色高爾基體熒光探針
BODIPY TR 神經(jīng)酰胺(BODIPY TR-Ceramide, Golgi-Tracker Red)也被稱為 高爾基體紅色熒光探針,是一種神經(jīng)鞘脂(sphingolipid)類的紅色/橙色熒光染料,一般應用于染色活細胞中的高爾基體。熒光波長:在 589 nm 處具有峰值激發(fā),在 616 nm 處具有峰值發(fā)射(Ex/Em=589/617nm)。
BODIPY TR 神經(jīng)酰胺活細胞染色方案:
一、BODIPY TR 神經(jīng)酰胺?工作液的配制
1. 第一次使用本品,可將 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)根據(jù)單次用量分裝,比如10μl/管。本品一管含30μl(總量:1mg),由于本身量微少,務必低速離心后再開蓋,然后用低吸附槍頭吸取母液,并分裝-20℃凍存,避免反復凍融。
2. 吸取少量 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)按照1:100的比例用Golgi-Tracker稀釋液來稀釋,比如:取10μl BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀釋液中,混勻后即為BODIPY TR 神經(jīng)酰胺工作液,工作液請現(xiàn)配現(xiàn)用。
※ 【注意事項】:BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 的工作濃度可以根據(jù)實際情況進行適當調(diào)整,推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為1:50~1:200。
二、活細胞高爾基體的熒光標記
1. 去除細胞培養(yǎng)液,用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液(含鈣鎂)或其他緩沖液來洗滌生長在蓋玻片上的細胞。
2. 去除洗滌液,加入新鮮配制的 BODIPY TR 神經(jīng)酰胺 染色工作液,4℃孵育30min。
3. 吸走染色液,用冰浴預冷的細胞培養(yǎng)液洗滌細胞3次左右,換新鮮培養(yǎng)液37℃再孵育30min。
4. 用新鮮培養(yǎng)液再洗滌一次,隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到高爾基體呈明亮的強熒光染色,而細胞內(nèi)的其他膜系統(tǒng)呈比較微弱的熒光染色。
圖:BODIPY TR Ceramide 應用于小鼠原代脾細胞 48 小時。染料直接添加到介質(zhì)中,應用染料后 2 小時、8 小時、14 小時、24 小時和 48 小時拍攝圖像。圖像使用了偽紅色(可參見其他圖像以了解通常橙色)