重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）是一種高靈敏度、通用性的試劑盒，用于定量檢測重組類胰蛋白酶及其類似物。該試劑盒能夠?qū)χ虚g體、半成品和成品生物制品中殘留的重組胰蛋白酶（TrypLE）進行敏感、特異和準(zhǔn)確的檢測。該試劑盒具有擴展的檢測范圍，為0.1-16 ng/mL，并將優(yōu)化的定量限制降低至0.1 ng/mL。 ? 艾美捷重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）基本參數(shù)： 目錄號：A-QEK003 規(guī)格：100mL 儲存：在黑暗中2-8°C（試劑盒標(biāo)簽上顯示了生產(chǎn)日期和保質(zhì)期。） ?

重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）檢測原理：

該試劑盒利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)檢測微量樣品中TrypLE的量。將捕獲抗體包被在96孔酶標(biāo)記板上以產(chǎn)生固相抗體。隨后，添加標(biāo)準(zhǔn)品和試樣，然后添加辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體。這形成了固相抗體TrypLE檢測抗體三明治復(fù)合體。反應(yīng)后，進行洗滌，并加入顯色基質(zhì)進行著色發(fā)展在HRP的催化和停止解決方案（如下圖所示）。在450nm和630nm處測量吸光度（OD值）630nm作為參考波長。OD值與樣品中TrypLE含量呈正相關(guān)。

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性能規(guī)范：

檢測限制：小于0.1 ng/mL

定量限制：0.1 ng/mL

線性范圍：0.1-16 ng/mL

準(zhǔn)確度（回收率）：70% - 130%

準(zhǔn)確度（測量偏差）：≤?15%

重復(fù)性（批內(nèi)變異）：≤?10%

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試劑制備：

1.?洗滌緩沖液（1×）：將洗滌緩沖液（20×）與去離子水按照1:20的比例稀釋，例如，將10 mL洗滌緩沖液（20×）與190 mL去離子水混合。注意：如果洗滌緩沖液（20×）出現(xiàn)結(jié)晶，輕輕搖晃室溫下或在37°C的水浴中，直到結(jié)晶完全溶解后再稀釋。

2.?底物溶液的制備：將發(fā)展溶液A和發(fā)展溶液B體積相等地混合，充分?jǐn)嚢瑁⒋娣旁诒芄鈼l件下。注意：不要提前太久準(zhǔn)備底物溶液。通常，在使用前的10分鐘內(nèi)準(zhǔn)備。如果混合后溶液變藍色，不要使用。

3.?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：（注意：每次實驗都要準(zhǔn)備新鮮的標(biāo)準(zhǔn)溶液）

將標(biāo)準(zhǔn)品（1?μg/mL）用樣品稀釋液稀釋至濃度為16 ng/mL，然后按照下面的圖表進行后續(xù)稀釋：

樣品制備：

將樣品平衡至室溫，并在加入測定之前將其充分混合。如果用戶需要稀釋試劑盒中提供的樣品或高濃度標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒可用于稀釋。對于基于細胞的樣品，建議以3000rpm離心5分鐘，收集上清液，并進行測定。

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程序分析：

所有操作應(yīng)在室溫下進行，并建議對所有樣品孔進行重復(fù)測量。

1.?將試劑盒組分在室溫下平衡30分鐘。從已平衡至室溫的鋁箔袋中取出所需的試紙條。使用記號筆標(biāo)記試紙條的順序。用板封密封剩余的試紙條，然后放回鋁箔袋中密封。將袋子密封并儲存在2-8°C的環(huán)境中。注意：在洗板過程中，試紙條可能容易脫落，因此要注意正確標(biāo)記。

2.?樣品孵育：將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品加入微孔板孔中（建議順序：標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔、樣品孔；以濃度梯度加入標(biāo)準(zhǔn)品）。每孔加入100 μL，用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度搖動孵育1小時。注意：控制樣品加入時間在10分鐘內(nèi)，以避免隨時間漂移。在孵育過程中，不適當(dāng)?shù)姆忾]或不完全封閉可能導(dǎo)致反應(yīng)溶液蒸發(fā)并產(chǎn)生實驗誤差。

3.?洗板：孵育后，小心取下板封并倒掉孔中的液體。用洗滌緩沖液（1×）洗板三次（每孔250 μL），輕輕敲干以去除樣品孔中的殘余液體。注意：如果使用手工洗滌，加入洗滌緩沖液（1×）后靜置1分鐘；如果使用洗板機，加入洗滌緩沖液后輕輕搖動5秒鐘。

4.?酶標(biāo)抗體孵育：向每個孔中加入酶標(biāo)抗體，每孔100 μL。用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度搖動孵育1小時。

注：每次清洗后加液前，檢查條帶是否固定，防止加液后固定條帶時濺出液體

5.洗板：同步驟3。

6.顯色：將預(yù)配置的基質(zhì)溶液添加到微孔板孔中，100μL/孔。密封板

使用平板封口機，在37°C的光線保護環(huán)境中孵育15分鐘。

7.停止反應(yīng)：加入停止溶液，100μL/孔。讀取均勻顯色后的吸光度。注意：讀數(shù)通常在添加停止溶液后20分鐘內(nèi)完成。

8.讀?。簩⑽⒖装宸湃胛⒖装遄x取器中，將雙波長設(shè)置為450/630nm，并讀取吸光度值。

注意：建議在微孔板閱讀器程序中設(shè)置5-10秒的搖動步驟。

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該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。