實驗材料：

基礎培養(yǎng)基??????????????????????????

血清（常規(guī)為FBS/NBS）

電動移液槍?

移液管[NEST]

無冰冰盒[NEST]

T25培養(yǎng)瓶[NEST]

自動旋蓋機[NEST]

盒裝無菌吸頭[NEST]

100mm細胞培養(yǎng)皿[NEST]

15mL、50mL無菌離心管[NEST]

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不能忘記的準備：

1.記得一定要預定干冰?。?！不然你細胞取出來可沒地方待了，要是液氮罐距離實驗室遠點，你的細胞可能就沒了。

2.用來轉移細胞的無冰冰盒一定要滅菌！??！當然，如果條件刻苦點的泡沫盒，也不要偷懶，無論什么裝載容器，都要提前滅菌，可以有效規(guī)避污染風險。

3.水浴鍋提前預熱至37℃。

4.培養(yǎng)基預熱至37℃。

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要開始了?。ㄇ煤诎澹?/span>

1.在生物樣本庫中搜尋到目標細胞,在液氮罐找到對應的細胞，放入預先準備好的無冰冰盒（容器）內(nèi)。冰盒內(nèi)裝有碎干冰，冰芯的鋁合金外殼協(xié)同高導熱的合金模塊，確保樣品能快速冷卻，孔之間的溫度差異小于0.1℃，能很好的維持樣品間的溫度一致性。

2.在細胞進入水浴鍋解凍前，務必將凍存管豎直立在桌面上10~20s，這樣之后，可能排空存在在凍存管蓋縫隙內(nèi)的液氮。尤其是外旋蓋的凍存管，特別要注意！不然在水浴解凍的時候有概率會砰的一聲爆發(fā)出來！極為危險。

3.將凍存管在37℃水浴鍋內(nèi)水浴解凍，因為DMSO在常溫情況下對細胞有毒副作用，若解凍時間過長，會導致細胞損傷并影響其存活率，所以一定要快，解凍過程在1~2min內(nèi)完成。

4.解凍完成后，在生物安全柜內(nèi)，用自動旋蓋機打開凍存管，之后在移液槍將凍存管內(nèi)細胞復懸，然后將細胞懸液轉移至含有5~10ml培養(yǎng)基的離心管中，1000rmp離心5min（根據(jù)各自細胞的特新調(diào)整離心力和離心時間）。如果沒有培養(yǎng)基稀釋，在離心過程中較高濃度的DMSO會對細胞損傷，影響活存活率！

5.丟棄上清，里面還有DMSO和死去細胞的裂解產(chǎn)物，這不是我們所需要的。將剩余的細胞用培養(yǎng)基稀釋復懸，稀釋比例為1:10~1:15，再按照大家各自實驗需求，分裝到100mm培養(yǎng)皿或者T25瓶中，顯微鏡觀察細胞狀態(tài)，然后轉移至細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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復蘇后的注意點：

復蘇后記得每天都要觀察細胞狀態(tài)，及時更換培養(yǎng)基，確保細胞所需營養(yǎng)的充足和生長環(huán)境的清潔。

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使用到的NEST產(chǎn)品：

移液管[NEST]

無冰冰盒[NEST]

T25培養(yǎng)瓶[NEST]

自動旋蓋機[NEST]

盒裝無菌吸頭[NEST]

100mm細胞培養(yǎng)皿[NEST]

15mL、50mL無菌離心管[NEST]