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基于CRISPR / Cas13a的便攜式電化學發(fā)光芯片用于miRNA檢測

2022-02-11 09:35 作者:北科納米  | 我要投稿



MicroRNA(miRNA)作為腫瘤早期臨床診斷的潛在生物標記物得到了廣泛研究。開發(fā)具有高特異性,靈敏度和可靠的miRNA檢測平臺仍任重道遠。電化學發(fā)光(ECL)技術可大大降低背景噪音并提高檢測靈敏度。紙質ECL生物傳感器的開發(fā)進一步使ECL適用于即時檢測。簇狀規(guī)則間隔的短回文重復序列(CRISPR)/ Cas13a作為高保真,高效且可編程的CRISPR RNA(crRNA)引導的RNase,開創(chuàng)了下一代生物傳感技術。然而,現(xiàn)有的基于CRISPR / Cas13a的檢測通常面臨靈敏度和特異性之間的折衷。在這項研究中,華南師范大學刑達教授團隊構建了由CRISPR / Cas13a驅動的便攜式ECL芯片(PECL-CRISPR)。


1. 開發(fā)了一種由CRISPR / Cas13a驅動的便攜式ECL芯片(名為PECL-CRISPR),用于miRNA的超靈敏和高特異性分析。與以前的基于Cas13a的信號放大策略相比,PECL-CRISPR平臺不僅利用CRISPR / Cas13a的反式切割活性來介導隨后的指數(shù)擴增以顯著提高檢測靈敏度,而且充分利用了Cas13a的特異RNA識別能力實現(xiàn)單一基本分辨率。

2. 在優(yōu)化條件下,該平臺可以為miR-17提供1×10^-15 M的檢測限。更重要的是,該平臺可以通過在crRNA的特定位點靈活引入錯配來區(qū)分miRNA靶點與其高度同源的家族成員(miR-17和let-7家族成員),提供單核苷酸分辨率,從而將miRNA靶標與其高度同源的家族成員區(qū)分開來。

3. 引入“光開關”分子[Ru(phen)2dppz]^2+避免了繁瑣的電極修飾和清洗過程,從而簡化了實驗過程,降低了測試成本,并改善了結果的再現(xiàn)性。對來自腫瘤細胞裂解物的miRNA的分析還表明,該平臺具有分子診斷的巨大潛力。

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