原理：

操作步驟：

1.制備細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。

我采用的方法是細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，直接用計(jì)數(shù)儀會(huì)方便一點(diǎn)

1）制備細(xì)胞懸液——貼壁消化離心重懸混勻，懸浮細(xì)胞離心重懸混勻（我是10cm皿，約鋪滿百分之七八十后，1ml培養(yǎng)基重懸，然后取10ul+90ul培養(yǎng)基）

2）擦拭干凈計(jì)數(shù)板，在上下兩個(gè)計(jì)數(shù)池的蓋玻片的邊緣滴上一滴細(xì)胞懸液，令其虹吸進(jìn)入計(jì)數(shù)池。強(qiáng)調(diào)動(dòng)作穩(wěn)定，勿推動(dòng)蓋玻片（我是取10ul在紅標(biāo)地方打出即可，綠標(biāo)表示蓋玻片）

3）顯微鏡下計(jì)數(shù)：8個(gè)格分別計(jì)數(shù)，取平均值A(chǔ)（計(jì)上不計(jì)下，記左不記右）

4）計(jì)算細(xì)胞密度

一個(gè)大格體積是0.1mm3，原培養(yǎng)基細(xì)胞密度=A個(gè)/0.1mm3X10=10A萬(wàn)個(gè)/ml

2.細(xì)胞活性檢測(cè)

1）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl（每個(gè)孔里約1000個(gè)細(xì)胞），同樣的樣本可做3個(gè)（若干個(gè)）重復(fù)。

如果一個(gè)樣本做三個(gè)復(fù)孔做7天

我就需要21000個(gè)細(xì)胞，也就是21000/10A萬(wàn)=Bml=Cul，補(bǔ)充至2100ul，加孔即可

2）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃, 5%CO2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。
3）每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過(guò)程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。

加10ul我怕不能混勻，于是我按照是將培養(yǎng)液吸出,將配置的cck8溶液加入110ul（按照10ulcck8和100ul培養(yǎng)基來(lái)配置）
4）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h。因?yàn)榧?xì)胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6h）。
5）酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光值（OD）。
6）若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室溫下避光保存，這樣可以保證OD值在24h內(nèi)不發(fā)生變化。

然后每天同一時(shí)間測(cè)一下OD值，，七天做完就可以做折線圖啦

目前關(guān)于CCK8我只做了細(xì)胞活性檢測(cè)，后面做了再補(bǔ)充