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Worthington血漿胺氧化酶 (PAO) 說(shuō)明書

2022-07-27 15:10 作者:艾美捷  | 我要投稿

血漿胺氧化酶?(PAO)?催化反應(yīng):

RCH 2 NH 2 + O 2 + H 2 O?→?RCHO + NH 3 + H 2 O 2

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牛血漿胺氧化酶的分子量為?170 kDa,精胺的最適?pH?值為?6.2,亞精胺的最適?pH?值為?7.2。胺氧化酶分為兩類:血漿胺氧化酶所屬的含吡哆醛和銅的酶,以及含F(xiàn)AD的氨基氧化酶。天然底物包括兒茶酚胺、色胺衍生物和其他生理活性胺。血漿胺氧化酶用于需要氮基轉(zhuǎn)移的研究。該分子由兩條相同的多肽鏈組成。每個(gè)分子有兩個(gè)磷酸吡哆醛和兩個(gè)?Cu +原子。牛血漿胺氧化酶受銅螯合劑、許多羧基試劑如銅酮、羥胺和氰化物的抑制。苯甲酸和苯甲醇都是非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑(KI = 30?和?34mM?分別)。Worthington?采用的測(cè)定胺氧化酶的測(cè)定法基本上是?Tabor等人,JBC,?208,645,(1954)?的測(cè)定法,反應(yīng)溫度降至?25°C。

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艾美捷Worthington?血漿胺氧化酶?(PAO)化學(xué)性質(zhì):

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穩(wěn)定性/儲(chǔ)存:?-20°C?可穩(wěn)定保存?12?個(gè)月。儲(chǔ)存在-20°C。

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單位定義:在?25°C、pH 7.2?條件下,1?個(gè)國(guó)際單位每分鐘氧化?1μmole?芐胺。

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技術(shù)說(shuō)明:?1 IU?等于?4,330 Tabor?單位。(TU)

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艾美捷Worthington?血漿胺氧化酶?(PAO)測(cè)定方案:?

方法: Kapeller-Adler (1971)?徹底審查了胺氧化酶的測(cè)定。Worthington?采用的方法本質(zhì)上是?Tabor等人的方法。(1954)?反應(yīng)溫度降至?25°C。

反應(yīng)速度由芐胺氧化引起的?250 nm?處吸光度的增加來(lái)確定。在指定條件下,在?25°C?和?pH 7.2?條件下,一個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致每分鐘氧化?1?微摩爾芐胺。如此定義的一個(gè)國(guó)際單位相當(dāng)于?4330?個(gè)泰伯爾單位(泰伯爾和泰伯爾,1972?年)。

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試劑:

67 mM?磷酸鉀緩沖液?pH 7.2

1.0% v/v (0.10 M)?芐胺(如果有顏色,重新蒸餾)在?67 mM?磷酸鉀緩沖液中,pH 7.2(底物)

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酶:

在?67 mM?磷酸鉀緩沖液(pH 7.2)中溶解至濃度為?10 mg/ml。

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程序:

將分光光度計(jì)調(diào)整到?250 nm?和?25°C。將?2.8 ml?緩沖液和?0.1 ml?底物溶液倒入每個(gè)比色杯吸管中。

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在分光光度計(jì)中孵育?3-4?分鐘以達(dá)到溫度平衡并建立空白率(如果有)。加入?0.1 ml?酶溶液并記錄?A 250增加6-8?分鐘。從曲線的線性部分計(jì)算 ΔA 250 /分鐘??赡軙?huì)出現(xiàn)?2-3?分鐘的延遲,之后反應(yīng)應(yīng)與?A 250為?0.75?呈線性關(guān)系。

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艾美捷Worthington?血漿胺氧化酶?(PAO)相關(guān)參考文獻(xiàn):

1.Achee, F., Chervenka, C., Smith, R., and Yasunobu, K.: XII. The Association and Dissociation, and Number of Subunits of Beef Plasma Amine Oxidase , Biochemistry 7, 4329, 1968

2.Bachrach, U.: Metabolism and Function of Spermine and Related Polyamines , Annu Rev Microbiol 24, 109, 1970

3.Bachrach, U.: Function of Naturally Occurring Polyamines,, Academic Press, NY, , 1973

4.Bachrach, U., and Reches, B.: Enzymic Assay for Spermidine , Anal Biochem 17, 38, 1966

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Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。

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Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。


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