磷脂酶?A2?代表一類(lèi)熱穩(wěn)定的鈣依賴(lài)性酶，可催化?3-n-磷酸甘油酯的?2-酰基鍵水解。這種酶被命名為磷脂酶?A2?以表示其?2-?；禺愋?(Uthe 1971)。

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已從胰腺、蛇和蜜蜂毒液中分離出磷脂酶?A2。福斯特等人。(1986)，陳等人。(1982), Coulard等人。（1987?年）和?Horigome等人。（1987?年）關(guān)于血小板磷脂酶?A2?的報(bào)告。Verheij等人已經(jīng)報(bào)道了人類(lèi)胰腺?PLA2?的一級(jí)結(jié)構(gòu)。（1983?年）。

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磷脂酶參與脂質(zhì)代謝，是生物膜結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的重要探針。道森?1973?年）。

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艾美捷Worthington?磷脂酶?A2化學(xué)性質(zhì)：

組成：

兩種表現(xiàn)出磷脂酶?A?活性的蛋白質(zhì)（A 2-?α、A 2-?β）已從Crotalus adamanteus中分離出來(lái)（Saito?和?Hanahan 1962，以及?Wells?和?Hanahan 1969）。每種蛋白質(zhì)都由二聚體亞基組成（Wells 1971）。這兩種蛋白質(zhì)具有相似的活性，但在色譜和電泳上是不同的。海因里克森等人。(1977)?報(bào)道了這兩種酶的獨(dú)特結(jié)構(gòu)特征和磷脂酶?A2-α 的完整氨基酸序列。這兩個(gè)亞基在一個(gè)氨基酸上不同；?A 2-?α 在殘基?117?處含有谷氨酰胺，而酸性更強(qiáng) 的?A 2-?β 在該殘基處含有谷氨酸。

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蛋白質(zhì)登錄號(hào)：P00623?

分子量：30,000 (Wells 1969)

消光系數(shù)：??消光系數(shù)= 22.7 (Wells 1969)

等電點(diǎn)：A-α 和?A-β 分別為?4.55?和?4.40 (Saito 1962)

活化劑：鈣離子?(Dennis 1973)

抑制劑：鋅、鋇和錳離子（Golec等人1992?和?Uthe 1971）

特異性：該酶特異性催化?L-?α 磷酸甘油酯的β-脂肪酯鍵的水解?(Van Deenen 1963)。

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艾美捷Worthington?磷脂酶?A2?檢測(cè)：

Method :?源自滴定測(cè)定程序的磷脂酶?A2?制劑的活性值可能完全取決于卵磷脂的來(lái)源和類(lèi)型、其作為底物乳液的制備、反應(yīng)混合物的其他組分以及使用的方法學(xué)/儀器。文獻(xiàn)中報(bào)道的高純度毒液磷脂酶?A2?的值范圍為?200?至?3000?單位/mg。分析系統(tǒng)之間的比較是困難的。已發(fā)現(xiàn)以下測(cè)定在我們的實(shí)驗(yàn)室中是可重復(fù)的。在特定條件下，一個(gè)單元在?pH 8.9?和?25°C?下每分鐘從卵磷脂乳液中釋放?1?個(gè)微摩爾可滴定脂肪酸。

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試劑：

0.1 M?氯化鈣

1.0 M?氯化鈉

卵磷脂乳液：在?250 ml?燒杯中稱(chēng)取?4.0?克試劑級(jí)大豆卵磷脂，加入?30 ml 1.0 M?氯化鈉、10 ml 0.1 M?氯化鈣和?100 ml?試劑級(jí)水。在?4°C?下攪拌?30?分鐘后，在?Branson?超聲波儀或同等設(shè)備上以最大功率對(duì)混合物進(jìn)行?10?分鐘的超聲波處理。用試劑級(jí)水稀釋至終體積為?200 ml。

0.01-0.02 N NaOH -?標(biāo)準(zhǔn)化

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酶：

將酶以?1.0 mg/ml?的濃度溶解在試劑級(jí)水中。在運(yùn)行測(cè)定時(shí)將此儲(chǔ)備溶液保持在冰上。使用前立即在試劑級(jí)水中進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。

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程序：

可以使用自動(dòng)滴定儀或?qū)嶒?yàn)室?pH?計(jì)進(jìn)行滴定。反應(yīng)容器應(yīng)保持在?25°C。

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空白率測(cè)定：將?15 ml?卵磷脂乳液移入?25°C?的反應(yīng)容器中。將?pH?值調(diào)節(jié)至?8.9，并在獲得恒定速率后記錄將?pH?值保持在?8.9 3-5?分鐘所需的滴定劑體積。將“空白速率”確定為從曲線(xiàn)的最后線(xiàn)性部分每分鐘添加的滴定劑體積。

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樣品測(cè)定：在上述乳液中加入適當(dāng)稀釋的酶。記錄將?pH?值保持在?8.9 4-5?分鐘所需的滴定劑量。從曲線(xiàn)的線(xiàn)性部分確定“采樣率”為每分鐘添加的滴定劑體積。

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Worthington核心酶：包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

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Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。