Autocamtide 2, amide是鈣調(diào)蛋白激酶 (CaMK) 家族實(shí)驗(yàn)的底物(100 μM final concentration)。
Autocamtide 2, amide is a substrate (100 μM final concentration) for CaMK family assays.

編號: 200825
中文名稱: 鈣調(diào)蛋白激酶底物Autocamtide 2, amide
英文名: Autocamtide 2, amide
單字母: H2N-KKALRRQETVDAL-NH2
三字母: H2N-Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Thr-Val-Asp-Ala-Leu-NH2
氨基酸個(gè)數(shù): 13
分子式: C65H119N23O19
平均分子量: 1526.78
精確分子量: 1525.91
等電點(diǎn)(PI): 11.66
pH=7.0時(shí)的凈電荷數(shù): 2.98
平均親水性: 0.9
疏水性值: -0.97
來源: 人工化學(xué)合成，僅限科學(xué)研究使用，不得用于人體。
儲存條件: 負(fù)80℃至負(fù)20℃
標(biāo)簽: 酶底物肽

Caspase酶對應(yīng)的底物，Caspases（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，半胱氨酸依賴性天冬氨酸定向蛋白酶）是一類蛋白酶家族，其功能與凋亡（程序性細(xì)胞死亡），壞死和發(fā)燒（炎癥）的過程密切相關(guān)。

什么是胱天蛋白酶？

胱天蛋白酶（Caspases）是含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶，它們是為細(xì)胞凋亡的主要介質(zhì)。多種受體，例如TNF-α 受體，F(xiàn)asL受體，TLR和死亡受體，以及Bcl-2和凋亡抑制劑（IAP）蛋白家族參與并調(diào)節(jié)該caspase依賴性凋亡途徑。一旦Caspase受到上游信號（外部或內(nèi)在）刺激被激活，即會參與執(zhí)行下游蛋白底物的水解作用，并觸發(fā)一系列事件，導(dǎo)致細(xì)胞分解，死亡，吞噬作用和細(xì)胞碎片的清除。

人Caspases酶

人的Caspases家族基于序列相似性和生物學(xué)功能等共性主要可分為三大類：第一類由具有長胱天蛋白酶募集結(jié)構(gòu)域的“炎癥”胱天蛋白酶組成，他們對P4位上的較大的芳香族或疏水性殘基具有親和力。第二類由具有短的前體結(jié)構(gòu)域的“細(xì)胞凋亡效應(yīng)”胱天蛋白酶組成，而第三類由具有長的前提結(jié)構(gòu)域的Pap位置具有亮氨酸或纈氨酸底物親和力的“凋亡引發(fā)劑”胱天蛋白酶組成（表1）。

啟動器Caspase和效應(yīng)器Caspase酶

根據(jù)其在凋亡胱天蛋白酶途徑中的作用，胱天蛋白酶可分為兩類：啟動器和效應(yīng)器Caspase酶。啟動器和效應(yīng)器Caspas酶都具有由小亞基和大亞基組成的催化位點(diǎn)，Caspase酶的識別位

凋亡啟動器Caspase酶，例如caspase-2，-8，-9和-10可以啟動caspase激活級聯(lián)反應(yīng)。Caspase-8對于形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物（DISC）是必不可少的，并且在激活后，Caspase-8激活下游效應(yīng)子Caspase（例如Caspase 3）并介導(dǎo)線粒體中細(xì)胞色素c的釋放。Caspase-8已被證明對IETD肽序列具有相對較高的底物選擇性。凋亡效應(yīng)胱天蛋白酶例如Caspase-3，-6和-7雖然不負(fù)責(zé)啟動級聯(lián)途徑，但是當(dāng)被激活時(shí)，它們在級聯(lián)的中間和后續(xù)步驟中起著不可或缺的作用。Caspase-3（CPP32 / apopain）是關(guān)鍵效應(yīng)器，因?yàn)樗糯罅藖碜詥悠鰿aspase的信號，使用對Caspase-3有選擇性的DEVD肽序列對活化的Caspase-3進(jìn)行檢測，可以檢測Caspase-3的活性。

Caspase酶底物和抑制劑

Caspase底物和抑制劑由兩個(gè)關(guān)鍵成分組成：Caspase識別序列和信號產(chǎn)生或蛋白酶抑制基序。不同Caspase識別序列不同，一般由三個(gè)或四個(gè)氨基酸組成（表2）。Caspase酶識別序列的N端通常有乙?；ˋc）或碳苯甲氧基（Z）基團(tuán)修飾，以增強(qiáng)膜的通透性。對應(yīng)的Caspase識別特定的肽序列為其酶促反應(yīng)切割位點(diǎn)，釋放產(chǎn)生信號或抑制信號的基序。Caspase的顯色和熒光底物均以相似的方式起作用，其中底物的信號或顏色強(qiáng)度與蛋白水解活性成正比。

Caspase酶的顯色底物

Caspase的顯色底物是有Caspase識別序列及生色基團(tuán)組成，常見的生色團(tuán)有pNA（對硝基苯胺或4-硝基苯胺），可使用酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)在405 nm處進(jìn)行光密度檢測。

Caspase的熒光底物

Caspase的熒光底物的結(jié)構(gòu)包含與半胱天冬酶識別相關(guān)的熒光團(tuán)，例如7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）， Rhodamine 110（R110）或ProRed?620。R110的Caspase底物比基于香豆素的Caspase底物（例如AMC和AFC）更敏感，但由于兩步裂解過程，其動態(tài)范圍更窄。 建議將R110標(biāo)記的Caspase底物用于終點(diǎn)法測定，而將AMC和AFC標(biāo)記的 Caspase底物用于動力學(xué)測定。