GelRed簡介

GelRed 是一種嵌入核酸染料，用于分子遺傳學的瓊脂糖凝膠 DNA 電泳。 GelRed 在結(jié)構上由兩個由線性氧化間隔物橋接的乙錠亞基組成。GelRed 是一種熒光團，其光學性質(zhì)與溴化乙錠基本相同。

gelred化學結(jié)構式

?當暴露在紫外線下時，它會發(fā)出橙色熒光，與 DNA 結(jié)合后會強烈增強。 該物質(zhì)作為溴化乙錠的毒性更小、更敏感的替代品上市銷售。gelred 和 EtBr 具有幾乎相同的光譜（下圖），因此您可以直接用 gelred替換 EtBr，而無需更改現(xiàn)有成像系統(tǒng)。 此外，gelred 遠比 EtBr 靈敏。

Gelred 儲存和處理:
? ? ?GelRed 是一種非常穩(wěn)定的染料。 我們建議您存儲在室溫下 10,000X 水溶液。儲存在較低的溫度，如 4℃. 可能發(fā)生染料沉淀。在長期低溫儲存期間，發(fā)生這種情況時，加熱45℃熱水浴中的溶液

50℃ 兩分鐘和/或渦旋解決方案。 染料的 1X 和 3X 工作溶液可以是在室溫下避光保存至少一年。 長期儲存時應避免光照。 但是，染料可以常溫在環(huán)境光下處理，染色過程中不會出現(xiàn)任何實驗問題。

Gelred 使用方法：

GelRed可以預制到瓊脂糖凝膠中，但是GelRed可能會影響到預制膠中DNA樣品的遷移率和分辨率，因此推薦使用凝膠后染色法（泡染法）。在聚丙烯酰胺凝膠中不推薦使用預制凝膠的方法，最好用泡染法。GelRed染色凝膠適用于下游的應用，如克隆、連接和測序。通過苯-酚/氯仿抽提和醇沉淀能夠有效地將DNA中的GelRed移除。

A. 預制凝膠法
1. 常規(guī)方法準備熔化的凝膠。預制膠法不適用聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2. 將GelRed（10,000X）原液以1:10,000比例加入到熔化的凝膠中，混合均勻。（GelRed可在加熱后的凝膠冷卻至45℃左右時添加。）
3. 倒膠，室溫放置等待凝固。
4. 按常規(guī)方法上樣電泳。（注：預制膠中橙色的G示蹤染料和GelRed不兼容。）
5. 觀察染色凝膠使用標準的透照儀(302或312 nm)，成像使用溴化乙錠濾光器，SYBR或GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。
6. 未使用的含有GelRed的預制凝膠可以重新熔化做膠，為保證最佳熒光信號，酌情添加適量染料。不建議長期儲存含有GelRed熔化形式的瓊脂糖。含有GelRed的預制膠可以保存在4℃供下次使用。

B. 泡染法
1. 按照常規(guī)方法進行凝膠電泳。
2. 稀釋 GelRed ：用水將10,000X儲備液稀釋3300倍制成3X染色液。通常情況下50mL染色液足夠染一小塊凝膠。（注：染色液中含有0.1 M NaCl能增強靈敏度，但可能會促使凝膠染色出現(xiàn)沉淀。）
3. 把凝膠放于合適的容器，如聚丙烯染色托盤中。添加足量的3X染色液至浸沒凝膠。
4. 室溫緩慢振蕩染色30min。注：最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同略有不同。對于含3.5-10%丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介于30min至1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。
5. 不必脫色，必要的話可以水洗以降低背景值。
6. 使用標準的透照儀(302或312 nm)觀察染色凝膠，成像使用溴化乙錠濾光器，SYBR 或 GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。
7. 染色液可重復使用2-3次，室溫下避光保存。

Gelred 應用：

? ? 1. DNA或RNA的電泳;
? ? 2.預制或電泳后染色;
? ? 3.瓊脂糖、聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA、PFGE 或甲醛凝膠;
? ? 4.限制性內(nèi)切酶作圖;
? ? 5.PCR擴增子檢測;
? ? 6.印記雜交;
? ? 7.DNA 條帶純化、克隆和測序;
? ? 8.COMET 檢測;
? ? 9.毛細管電泳;