FlyCut? 酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut?酶在通用CutOne中顯示出優(yōu)異的活性? 和CutOne? 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個反應管中同時工作，并消除了連續(xù)消化的需要。FlyCut? 酶已通過多項嚴格的質(zhì)量控制，可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne??Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

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艾美捷快速內(nèi)切酶EcoRI：

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

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快速內(nèi)切酶EcoRI組分：

推薦反應條件

1x CutOne“”緩沖器；在37°C下培養(yǎng)；有關反應設置，請參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制

功能測試

在含有1μgλDNA和1μl FlyCut’EcoRI的CutOne“緩沖液中，在37°C下孵育15分鐘，20μl反應可通過瓊脂糖凝膠電泳確定完全消化。

長時間培養(yǎng)/星形活性測定

在含有1μgλDNA和1μl FlyCut“EcoRI的CutOne”緩沖液中，在37℃下孵育3小時，反應20μl，瓊脂糖凝膠電泳檢測到DNA模式?jīng)]有可檢測的核酸酶降解。長期孵育可能導致星形活性。

結扎和清算

用FlyCut’“EcoRl在37℃下消化10倍后，在22℃下可將>95%的DNA片段與T4 DNA連接物連接。瓊脂糖凝膠電泳測定，在這些連接的片段中，>95%的片段可用FlyCut”EcoRI重切。

非特異性核酸內(nèi)切酶活性

在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl FlyCut’’EcoRI的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育4小時，20μl反應可使瓊脂糖凝膠電泳測定的刻痕或線性化形式的轉(zhuǎn)化率<10%。

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藍/白篩選試驗：

用1μl FlyCut消化含有l(wèi)acZα基因的合適載體??EcoRI。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產(chǎn)生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。FlyCut? 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

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在推薦的反應條件下，該酶可在5~15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的最適反應溫度為37°C。

當?shù)孜顳NA被CpG甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

當?shù)孜顳NA被EcoBI甲基化酶甲基化時，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。

該酶在80°C下保溫20分鐘即可熱滅活，保溫3小時不顯示星形活性，但保溫時間較長可能會產(chǎn)生星形活性。