干貨|99% 的人不知道的 PCR 耗材小秘密!
要想成為真正的PCR達人,并非易事。一個小小的環(huán)節(jié)都可能讓整個實驗掛掉,也正是因此,PCR成為了資深科研者們心中的痛。不要說實驗本身,其實就連實驗的耗材都隱藏著大學問,工欲善其事,必先利其器。今天我們就具體來說下PCR耗材中選擇選擇反應板的問題。
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PCR板通常采用96孔和384孔的形式,其次為24孔和48孔。使用的PCR儀和正在進行的應用的性質(zhì)將決定PCR板是否適合您的實驗。
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裙邊
PCR板的“裙”是板周圍的板。裙邊可為反應體系構(gòu)建時的移液過程提供較好的穩(wěn)定性,以及在進行自動機械處理時提供更好的機械強度。PCR平板可分為無裙邊,半裙邊和全裙邊。
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無裙邊板缺少周圍的面板(圖 A)。這種形式的反應板可與絕大多數(shù)PCR 儀和實時PCR儀的模塊適配,但不適用于自動化應用。

半裙邊板在板的邊緣周圍具有短的邊緣(圖 B),在移液過程中提供足夠的支撐。

全裙邊的PCR板具有覆蓋板高度的邊緣面板(圖 C)。這種板形式適用于具有突出模塊的PCR儀(可有利于自動化操作),可安全穩(wěn)固適配。全裙邊還增強了機械強度,使其非常適合在自動化工作流程中使用機器人平臺。

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板面
板的板面是指其上表面。全平面板設計適用大多數(shù)PCR儀,便于密封和處理。
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邊緣凸起板設計對于某些PCR儀器具有最佳適配性,有助于在不需要適配器的情況下平衡熱蓋壓力,確保最佳的的熱傳遞和可靠的實驗結(jié)果。

具有全平面板和凸起邊緣的 PCR 板
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顏色
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PCR板通常可提供多種不同的顏色形式,以便于對于樣品的視覺區(qū)分和鑒別,特別是在高通量實驗中。盡管塑料的顏色對DNA擴增沒有影響,但在設置實時熒光定量PCR的反應時,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色塑料耗材或者經(jīng)磨砂處理的塑料耗材,以實現(xiàn)靈敏和準確的熒光檢測。

qPCR使用透明和白色耗材的結(jié)果比較(A)與透明孔相比,白色孔Ct值更低(靈敏度更高)。(B)白色孔在技術(shù)重復中也表現(xiàn)出更高的一致性。
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白色耗材通過阻止熒光折射出管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時,更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比。此外,白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號,從而使重復實驗中的差異降至最低。
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不同品牌儀器,由于熒光檢測器位置設計不同,請參考生產(chǎn)廠家推薦的耗材。通常AppliedBiosystemsPCR儀,我們推薦您使用原裝的磨砂孔PCR 板,這些耗材經(jīng)過研發(fā)嚴格測試,可確保您獲得準確可靠的實驗數(shù)據(jù)。而對于Bio-RadCFX或Roche480 熒光定量PCR儀,廠家推薦使用白色PCR 板。
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外形
PCR板的外形是指其高度,因此“l(fā)ow profile(低容,低位)”意味著高度更低。低容耗材更短的設計最大程度減少了反應體系上方的空間,降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導效率。因此,同時兼容的情況下推薦優(yōu)先選擇低容耗材,即“快速”板或矮板。

標準和低容 PCR 耗材
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切角
切角是對PCR板的一個角缺失,取決于所需要適配的儀器。切角可能位于 96孔板的H1,H12或A12位置,或384孔板的A24位置。

帶有切角的 PCR 板
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ANSI/SBS 形式
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為了兼容不同的自動化液體處理高通量系統(tǒng),PCR板應符合美國國家標準協(xié)會(ANSI )和生物分子科學學會(SBS,現(xiàn)屬實驗室自動化和篩選協(xié)會( SLAS))。符合 ANSI/SBS的板具有標準的尺寸,高度,孔位置等,因而有助于于自動化處理。
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孔邊緣
PCR板的共同特點是在孔周圍有一個凸起的邊緣。該設計可有助于用封板膜進行密封以防止蒸發(fā)。

PCR 板凸起的孔邊緣。
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標記
PCR板上的字母數(shù)字標記將有助于識別單個孔及對應樣品的位置。通常為白色或黑色字跡的凸起字母,以便于查看。

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然而,在自動化流程中凸起的標記可能會干擾到密封的過程。對于自動化應用,刻字 (下圖 )可以改善板的外邊緣的密封性。

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可分割板
某些96 孔PCR板被設計成可分割的。該設計使得一整塊96孔板可以輕松被分割成更小的板,在不需要使用一整塊板時可減少耗材的浪費并降低成本。具有 24 孔分割的平板是最常見的,但32孔和8孔分割也可以提供方便和靈活性。

可分割的 PCR 板
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條形碼
在高通量實驗中,半裙邊和全裙邊的PCR板可以標記條形碼,以便于記錄和跟蹤。
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為了更為安全可靠地追蹤,條形碼標記應當不能被刮掉并能承受化學侵蝕和一定的溫度范圍(如 –196°C 至 120°C)。條形碼閱讀器的位置可能因自動化平臺而異,在這些情況下,4邊條形碼或自定義條碼是替代解決方案。

條形碼(A)帶有條形碼的 PCR 板。(B)常見的條碼格式。
ZENETIX旗下PCR板
材質(zhì):
高品質(zhì)聚丙烯
特點:
*優(yōu)質(zhì)聚丙烯(PP)制造,耐高溫、均勻性好、密封性好、透明度高
*板面平整、厚實、牢固、不易變形,管體薄壁設計,擁有良好的熱傳導性能,結(jié)果可靠,重復性強,確保高效PCR反應
*可使用8/12條狀管蓋或封板膜
*適用于0.1mL、0.2mL熱循環(huán)模塊
*透明PCR96孔板壁薄,透光性良好,更適合底部讀取熒光信號的儀器
*半裙邊板設計:可適配標簽或應用條碼
*無DNA酶、RNA酶和內(nèi)毒素