C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP )是一種發(fā)現(xiàn)較早的蛋白質(zhì)﹐可以作為監(jiān)測(cè)指標(biāo)，是急性期蛋白的主要成員之一。CRP在免疫反應(yīng)過(guò)程中能識(shí)別病原體和宿主受損細(xì)胞,對(duì)于CRP內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞的行為和機(jī)制還缺乏深入的研究。原因之一是純化原核表達(dá)的CRP有較大難度﹐不易獲得有體外活性的重組表達(dá)物。為解決這一技術(shù)難題。構(gòu)建了EGFP熒光標(biāo)記的人CRP原核表達(dá)質(zhì)粒。

?

EGFP-CRP蛋白,通過(guò)毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)該重組蛋白的生物活性進(jìn)行評(píng)價(jià).方法:用pET14b/EGFP-hCRP原核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)的重組蛋白通過(guò)親和色譜純化,梯度透析,獲得復(fù)性的His-EGFP-CRP蛋白;并用(HPCE)技術(shù)對(duì)復(fù)性的蛋白進(jìn)行檢測(cè),了解蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)及活性。

?

結(jié)果:轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),該質(zhì)粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21(DE3)中能夠被誘導(dǎo)表達(dá);通過(guò)包涵體變性溶解,親和色譜純化可獲得純度較高的 EGFP-CRP蛋白;HPCE分離發(fā)現(xiàn)復(fù)性后的-EGFP-CRP蛋白峰為多個(gè),其在電泳液pH值低于6時(shí)易檢出,EGFP-CRP與 THP-1細(xì)胞裂解物孵育后的檢測(cè)峰增多。

鏈霉抗生物素蛋白

熒光標(biāo)記甲藻細(xì)胞表面蛋白

熒光標(biāo)記酪蛋白

熒光標(biāo)記增強(qiáng)綠色熒光蛋白質(zhì)粒pEGFP

熒光標(biāo)記增強(qiáng)綠色熒光蛋白EGFP

熒光標(biāo)記β淀粉樣蛋白(Aβ)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型β淀粉樣蛋白(Aβ)

?

星戈瑞熒光2022.8