生物制藥N端測序
Edman降解(埃德曼降解)法,是由菲爾?埃德曼(Pehr Edman)首先創(chuàng)立用于肽鏈或蛋白質(zhì)中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法檢測的原理非常簡單,在堿性條件下反應(yīng),用異硫氰酸苯酯(Phenylisothiocyanate, PITC)與待檢測的蛋白質(zhì)(多肽)的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰(PTC)的衍生物,然后處理-關(guān)環(huán)-選擇性切斷肽鏈N-端,得到N-端氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接著用有機溶劑萃取衍生物,在酸的作用下,不穩(wěn)定的衍生物轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的的乙內(nèi)苯酰硫脲(PTH)衍生物,余下肽鏈中的酰胺鍵不受影響。通過用HPLC或電泳法分析生成的乙內(nèi)酰苯硫脲氨基酸(PTH-氨基酸),可以鑒定出氨基酸類別。重復(fù)氨基酸鑒定反應(yīng)可以達(dá)到對N端氨基酸按照從N端到C端的方向依次對氨基酸序列進(jìn)行分析。對于序列較長的蛋白質(zhì)(多肽),還可以將樣品先切成小的肽段,先對肽段序列分析,再將肽段信息進(jìn)行拼接即可獲得完整蛋白質(zhì)的序列信息。

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