復(fù)刻率極高！21個(gè)常見動(dòng)物模型構(gòu)建方法匯總
做科研的同學(xué)都明白動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的重要性，基礎(chǔ)研究中如果加入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分則使得研究更加趨于完善，投稿時(shí)中稿率也相應(yīng)會(huì)增加。但將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)做好卻不是一件容易的事情。
如今動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)已非常多，超全的動(dòng)物模型構(gòu)建方法整理給大家作為儲(chǔ)備。
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本次更新的動(dòng)物模型構(gòu)建方法有以下：
1、術(shù)后認(rèn)知功能障礙動(dòng)物模型
2、肺栓塞動(dòng)物模型
3、肝纖維化動(dòng)物模型
4、肺癌動(dòng)物動(dòng)物模型
5、糖尿病腎病動(dòng)物模型
6、腸炎動(dòng)物模型
其它15個(gè)由于篇幅有限，在文末放了下載方式（包括以上6種）
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篇幅有限，其它動(dòng)物模型構(gòu)建資料，在公眾號(hào)回復(fù)“模型002”領(lǐng)取。
骨科相關(guān)動(dòng)物模型（1.骨關(guān)節(jié)炎??2.骨質(zhì)疏松癥 ?3.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 ?4.強(qiáng)直性脊柱炎 ）
糖尿病相關(guān)動(dòng)物模型（1.糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化 ?2.糖尿病心肌病 3.糖尿病視網(wǎng)膜病變 ）
心血管疾病模型（1.動(dòng)脈粥樣硬化 ?2.心肌梗死 ?3.心肌缺血再灌注 ?4. 缺氧性肺動(dòng)脈高壓）
神經(jīng)疾病模型（1.缺血性腦卒中 ??2.神經(jīng)病理性痛 ?3.癲癇）
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一、術(shù)后認(rèn)知功能障礙動(dòng)物模型
1、脛骨骨折手術(shù)
構(gòu)建方法
[PMID:20818791、21041647、22190370、 27791037]
①C57BL/6J小鼠，2.1%異氟醚麻醉、皮下注射0.1mg/kg丁丙諾啡鎮(zhèn)痛；
②在左后掌背側(cè)刮除上表皮，0.5%葡萄糖酸氯己定和70%異丙醇消毒后，在脛骨外側(cè)的皮膚和筋膜上作縱向切口，露出骨頭；
③在脛骨近三分之一處鉆一個(gè)0.5mm的孔，插入0.38mm直徑的髓內(nèi)不銹鋼固定線，分離腓骨及脛骨周圍肌肉，周向剝離骨膜10mm；
④在脛骨中、遠(yuǎn)端三分之一處用剪刀截骨，產(chǎn)生骨折后，沖洗傷口，用8/0聚丙烯縫線縫合皮膚；
⑤皮下注射0.5 ml生理鹽水補(bǔ)充手術(shù)中的脫水。放在溫暖的盒子里恢復(fù)，從麻醉誘導(dǎo)到恢復(fù)整個(gè)過程持續(xù)15±5分鐘。
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2、腹部/心臟手術(shù)
構(gòu)建方法
[ PMID:26867718]
①用3%七氟醚麻醉大鼠，手術(shù)傷口周圍局部應(yīng)用馬卡因以及注射丁丙諾啡鎮(zhèn)痛，均配備頸靜脈導(dǎo)管，模仿長期置管的效果。
②腹部手術(shù)：沿腹白線切開，取出腸子，解剖腸系膜上動(dòng)脈并夾緊45分鐘，取下鉗，將腸子放回腹腔，分別縫合肌肉和皮膚。
③心臟手術(shù)：在第三和第四根左肋之間切開，肺部被輕輕推開，露出左心室，左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎45分鐘，結(jié)扎取出后，目測再灌注情況，分別縫合肌肉和皮膚。
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3、檢測指標(biāo)
[PMID:21041647、 27069541、20818791]
①ELISA檢測炎癥因子
②水迷宮檢測逃逸潛伏期、跨平臺(tái)數(shù)
③條件性恐懼實(shí)驗(yàn)：靜止減少
④TUNEL法檢測海馬神經(jīng)元凋亡
⑤抗CD11b小膠質(zhì)細(xì)胞
二、?肺栓塞動(dòng)物模型
構(gòu)建方法
①體內(nèi)血栓形成：
靜脈注射二磷酸腺苷溶液(250 mg/kg)誘導(dǎo)急性肺栓塞。[PMID：31438579] 麻醉小鼠，通過尾靜脈注射溶有2500單位/kg凝血酶的生理鹽水100μl，模型成活率約為80%，30min后處死小鼠。[PMID：27138487]
②體外血栓形成:
實(shí)驗(yàn)前一天，從C57BL/6小鼠尾巴上取200 μl血漿，與50 μl凝血酶和CaCl2混合。將混合物加入到內(nèi)徑1.2 mm的玻璃導(dǎo)管中，室溫下穩(wěn)定10分鐘，37℃水浴30分鐘，4℃過夜形成自體血栓，使用前將血栓切成1毫米長的塊。麻醉小鼠，將約30個(gè)自體血栓和0.4 mL生理鹽水注入右頸靜脈，注射1小時(shí)、1天和2天后處死小鼠，收集肺組織。[PMID：20660099]
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檢測指標(biāo)
[PMID：27138487、 29983855]
①血小板特異性表位CD41的免疫組織化學(xué)檢測肺血管內(nèi)血栓栓塞形成。
②每個(gè)肺葉平均肺栓塞數(shù)
③Masson stain組織學(xué)分析顯示大量血栓栓子
三、肝纖維化模型
構(gòu)建方法
①化學(xué)誘導(dǎo)肝纖維化
硫代乙酰胺（TAA）：每周三次腹腔注射100 mg/kgTAA，注射8周。[PMID:29721568]
四氯化碳(CCl4)：每周三次腹腔注射2 ml /kg 10% CCl4 ，共8周。
②膽管結(jié)扎肝纖維化
無菌條件下，異氟烷麻醉小鼠，腹中線切開2厘米，分離膽管、門靜脈和肝動(dòng)脈，用兩根5-0縫線進(jìn)行膽管結(jié)扎手術(shù)，去除多余的縫線，生理鹽水沖洗腹腔，縫合中線，給予鎮(zhèn)痛藥物治療，溫暖環(huán)境恢復(fù)，在術(shù)后第1、3、10和21天進(jìn)行指標(biāo)檢測。[PMID: 28194023]
檢測方法
[PMID:?28194023、 29721568]
①小鼠體重
②肝臟重量
③肝重/體重
⑤H&E染色部分肝細(xì)胞急性壞死和空泡化，并伴有炎性細(xì)胞浸潤。
⑥Masson trichrome ?stain和天狼星紅染色進(jìn)行檢測膠原蛋白在肝臟的分布，并估計(jì)肝纖維化程度。
⑦ELISA檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)
⑧ELISA檢測天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)
⑨ELISA檢測TNF-α、IL-1β、IL-6
四、肺癌動(dòng)物模型
構(gòu)建方法
①Ad-Cre重組腺病毒誘導(dǎo)
6 - 8周齡的Lox-Stop-Lox KRasG12D小鼠用麻醉，室溫下吸入AdCre-CaC（60 μl MEM, 2.5 μl AdCre (1010 pfu/ ml) 0.6 μl CaCl2 (1 M)重組腺病毒20 min。[PMID：21317887]
②HE染色：野生型肺的表面光滑而均勻，Lox-Stop-Lox KRasG12D肺4周后表面呈鵝卵石狀，產(chǎn)生肺癌病變[PMID:?11751630]
③人源肺癌細(xì)胞A549的裸鼠原位移植模型
1?×?10（10上標(biāo)6，這里打不出來上標(biāo)符號(hào)），帶有熒光素酶標(biāo)記的A549細(xì)胞培養(yǎng)基與基質(zhì)膠1:1混合，經(jīng)胸膜垂直注入裸鼠，每周用活體圖像監(jiān)測腫瘤生長情況一次。[PMID：30961670]
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檢測方法：
①活體成像
②HE染色
五、糖尿病腎病模型
構(gòu)建方法
①7-8 周DBA2/J小鼠用低劑量鏈脲佐菌素（STZ）連續(xù)注射5天，測量6小時(shí)空腹血糖來評(píng)估糖尿病的發(fā)病情況。
②每兩周用血糖儀測量血糖，每周記錄體重、食物和水的攝入量，空腹血糖200 mg/dl即為糖尿病。
③糖尿病發(fā)病15周后，用異氟烷麻醉小鼠，采集血液和腎臟進(jìn)行分析。[PMID：29309903]
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檢測指標(biāo)
[PMID：29330340、29309903]
①代謝籠進(jìn)行24小時(shí)的尿液收集，測定尿量、pH、尿蛋白及肌酐量
②空腹血糖水平
③體重
④HE染色箭頭表示浸潤細(xì)胞
⑤PAS染色檢測腎小球系膜基質(zhì)擴(kuò)張
⑥天狼星紅染色
⑦膠原蛋白IV
六、腸炎模型
構(gòu)建方法
①葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎:
②10周齡C57BL/6 m小鼠在飲用水中連續(xù)5天接受2%的DSS，監(jiān)測體重減輕情況。[PMID：25479760]
③2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎:
④8周大的雄性GPR109a /和野生型(WT) C57BL/6小鼠，然后，3.5mg的TNBS溶于100μL30%乙醇中，大約3厘米導(dǎo)管通過肛門進(jìn)入結(jié)腸。[PMID：29627390]
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檢測指標(biāo)
PMID：25479760、29627390
①體重
②HE染色：淋巴細(xì)胞大量浸潤，正常結(jié)構(gòu)破壞
③檢測炎癥因子
總結(jié)
①動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法多樣，需根據(jù)課題要求構(gòu)建；
②檢測指標(biāo)多樣：可多指標(biāo)檢測驗(yàn)證建模是否成功；
行為學(xué)：水迷宮、糖偏好、礦場、條件性恐懼；
組織病理：HE染色、 Masson染色、天狼星紅染色；
生化： TNFα 和IL-1β 和 IL-6 等炎癥因子；
細(xì)胞：神經(jīng)元凋亡，小膠質(zhì)細(xì)胞活化等。
篇幅有限，其它15種動(dòng)物模型構(gòu)建資料，在科研根號(hào)三公眾號(hào)回復(fù)“模型002”領(lǐng)取。
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