使用單甲氧基聚乙二醇–醛修飾超氧化物歧化酶的可行性。方法：單甲氧基聚乙二醇–醛在弱酸性環(huán)境下(pH5.3)修飾超氧化物歧化酶生成schiff堿,再于同樣環(huán)境下使用氰基硼氫化鈉還原schi堿生成穩(wěn)定的仲胺結構,利用SDS - PACE電泳對反應產物進行分子量鑒定。結果﹐單甲氧基聚乙二醇-醛可以成功修飾超氧化物歧化酶,耦聯(lián)條件溫和。結論﹐含醛基的化合物可以有效修飾蛋白質的氨基,建立了單甲氧基聚乙二醇–醛修飾超氧化物歧化酶的工藝。

實驗方法

1.單甲氧基聚乙二醇–醛( mPEG-醛)修飾

soD將mPEG -醛與SOD按摩小比o手4℃環(huán)境鹽緩沖液( pH 5.3),置于磁力現(xiàn)開上on的每L硼下反應24 h。加人摩爾比200倍于SOD的氰基硼氫化鈉,置于磁力攪拌儀上,在4℃環(huán)境下繼續(xù)攪拌24 h。產物在蒸餾水中使用MWo一濃縮后.所析24 h,每隔4h換1次水。用聚乙二醇濃縮后,所得溶液作為供試液。稱取50 mg sOD,溶于5 ml蒸餾水中,得濃度10 mg/ml的SOD對照品液。

2.樣品的制備取供試液15 Jl,SOD對照品

液15 ul,分別與等體積的2×電泳緩沖曹晚合已置于沸水浴中加熱3 min,得到樣的浴版以應戲很公溶液。取蛋白Marker 5 ul,與等體積的蒸餾水混合均勻,得 Marker。

3.?SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳惇分別取10 ul樣品溶液、對照品溶液以及蛋白Marker 上樣,初始電壓 100 kV,染料進入分離膠后電壓調至200 kV。經(jīng)SDs -聚丙酰胺凝膠電泳(分離版.I12電泳5%)至染料到達距凝膠底部1 cm處時,停止電泳，取出凝膠。

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產品名稱：甲氧基聚乙二醇馬來酰亞胺

英文名稱：mPEG-MAL

狀態(tài)：固體/粉末/溶液

產品規(guī)格：mg

保存：冷藏

儲藏條件：-20℃

儲存時間：1年

用途：科研

溫馨提醒：僅供科研，不能用于人體實驗

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產品名稱：甲氧基聚乙二醇醛基

英文名稱：mPEG-CHO

狀態(tài)：固體/粉末/溶液

產品規(guī)格：mg

保存：冷藏

儲藏條件：-20℃

儲存時間：1年

用途：科研

溫馨提醒：僅供科研，不能用于人體實驗

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瑞禧WFF.2023.2