腎小球硬化性腎病動物模型【疾病動物模型外包】

【造模機制】多柔比星可使腎小球毛細血管內(nèi)皮細胞和足細胞腫脹,足突融合消失,基底膜增厚,動物表現(xiàn)蛋白尿、高脂血癥,低蛋白血癥,氦質(zhì)血癥,腎功能低下,有發(fā)展成類似人類慢性硬化性腎病的趨勢。單側腎切除,可導致腎小球局灶、節(jié)段性硬化。采用單側腎切除并高低劑量多柔比星尾靜脈注射造模,可復制成典型腎小球硬化性腎病。

【造模方法】

1.動物及分組選用 SPF 級 SD 雄性大鼠,體重(200±20)g,適應性飼養(yǎng) 1 周后隨機分組。

2.模型制備造模組動物在麻醉下,行無菌手術摘除左腎,術后再將動物隨機分成 A,B兩組,A 組第 8天尾靜脈注射多柔比星(深圳萬樂藥業(yè)有限公司產(chǎn)品)5mg/kg,第 35 天尾靜脈注射生理鹽水 0.5ml;B 組第 8 天尾靜脈注射多柔比星 3mg/kg,第 35 天第 2 次尾靜脈注射多柔比星 2mg/kg。

3.樣本采集和指標測定于第 8 周末處死大鼠后,速取右腎少許腎組織作電鏡樣本,剩余腎組織自腎門處切成兩片做病理組織切片,光鏡觀察腎小球和腎小管間質(zhì)病理形態(tài)學改變,電鏡下觀察腎小球、腎小管間質(zhì)超微結構變化。其他實驗室檢查:代謝籠收集 24 小時尿(注射前,注射后第 4.8 周末),測尿量和尿蛋白定量。后眼眶靜脈叢采血(時間點同尿樣本),用 SYNCHRON CX-7 全自動系列化分析儀;BECKMEN 公司試劑盒測定尿素氮,肌酐、總蛋白、白蛋白、膽固醇、甘油三酯。采用 HPIAS-2000 高清晰度彩色圖文病理分析系統(tǒng)軟件進行病理圖像分析。每份標本至少計數(shù) 30 個腎小球,觀察毛細血管開放直徑,腎小球硬化指數(shù)、基質(zhì)增殖面積比。進行統(tǒng)計學分析。

【造模特點】第 8 周時高低劑量多柔比星模型組均出現(xiàn)尿蛋白排出增加,血脂升高,腎功能下降;高劑量多柔比星注射組光鏡下腎小球硬化達 80%以上,呈彌漫性,其中 25％～50％呈球性硬化,腎小球臟層上皮細胞足突廣泛融合或消失;腎小管病變嚴重,腎小管上皮細胞腫脹,顆粒變性,壞死甚至脫落入小管腔,可見大量蛋白管型;間質(zhì)纖維化和大量炎癥細胞浸潤;低劑量多柔比星注射組腎小球硬化呈局灶,節(jié)段性分布,腎小球肥大,腎小囊擴張,約50%腎小球有不同程度的硬化,球性硬化達 10%左右,間質(zhì)可見明顯纖維化和局灶性炎癥細胞。結論:多柔比星對腎小球臟層上皮細胞、毛細血管內(nèi)皮細胞及腎小管上皮細胞均有明顯毒性損傷;高低劑量多柔比星注射組均為病變穩(wěn)定的腎小球硬化模型,其中高劑量多柔比星注射組腎小球硬化模型為中晚期病理改變;低劑量多柔比星注射組為腎小球硬化早期病理改變。

【應用范圍】研究腎小球硬化性腎病的發(fā)病機制和治療方法。探討該類疾病發(fā)生發(fā)展規(guī)律,病理演變過程,將其分為腎小球肥大期、系膜硬化期、血管腔閉塞期。

【注意事項】

1.選擇腎切除的時機應在注射多柔比星之前在注射多柔比星之后摘除腎臟,易增加動物死亡率。2.單側腎切除宜采用背部切口如采用腹部切口,大鼠死亡率高于背部切口。死亡原因多為腹腔感染引起的腸壞死和腸梗阻、腸脹氣。

3.國產(chǎn)多柔比星與進口多柔比星的細胞毒作用有差別在劑量上應注意調(diào)整,以保證造模成功。文獻報道國產(chǎn)多柔比星主要有深圳萬樂藥業(yè)公司產(chǎn)品和上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品,進口多柔比星主要有日本制藥株式分社產(chǎn)品、意大利愛寶大藥廠產(chǎn)品等,國產(chǎn)多柔比星較進口多柔比星對腎臟毒性作用強,造模注射劑量應適當調(diào)整。如張悅等用一次性注射多柔比星(由意大利愛寶大藥廠生產(chǎn))溶液 7. 5mg/kg 制作微小病變型腎病模型,第 7 周時可見個別大鼠出現(xiàn)腎小球基底膜斷裂,節(jié)段性硬化;而國產(chǎn)多柔比星通常用量在 5mg/kg 內(nèi)即可在相同時間內(nèi)出現(xiàn)腎小球硬化。

4.尾靜脈注射時應準確多柔比星滲出靜脈外側,大鼠尾巴有腐爛現(xiàn)象。

5.造模前后不宜采血應與造模時間隔開,避免對大鼠的集中損傷,增加死亡率。

【模型評估】腎小球硬化是各種腎小球病變發(fā)展至終末期的一種不可逆的病理改變,是腎衰竭的主要病理基礎,初期表現(xiàn)為局灶節(jié)段性,后期則表現(xiàn)為彌漫性球狀分布。目前使用的腎小球硬化的動物模型主要有次全腎切除,腎動脈結扎外科模型,多柔比星、嘌呤霉素、柔紅霉素等藥物模型。多柔比星所致的腎小球硬化動物模型為穩(wěn)定的腎小球硬化模型,具有慢性進展性腎損害的特點,與人類進行性腎臟疾病的表現(xiàn)非常相似,優(yōu)于其他腎小球硬化動物模型。

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