Hepa1-6細胞是C57/L小鼠肝癌細胞系Hepa-1的衍生系。Hepa1-6細胞細胞表達白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、α1抗胰蛋白酶、淀粉酶基因，經檢測鼠痘病毒陰性。Hepa1-6細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)和癌癥研究，也是一種合適的轉染宿主。

此細胞可以在無血清的培養(yǎng)基中繁殖，培養(yǎng)基成分是：DMEM,75%;Waymouth＇sMAB87/3培養(yǎng)基，25%。添加3x10-8M硒。

Hepa1-6細胞基本信息

細胞名稱：小鼠肝癌細胞

細胞別稱：HEPA 1-6; Hepa-1-6; Hepa1-6

產品貨號：TCM-C734

種屬來源：小鼠

組織來源：肝

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

參考文獻："Darlington GJ. Liver cell lines. Methods Enzymol. 151: 19-38, 1987. PubMed: 3431441Darlington GJ, et al. Expression of liver phenotypes in cultured mouse hepatoma cells. J. Natl. Cancer Inst. 64: 809-819, 1980. PubMed: 6102619"

Hepa1-6細胞復蘇

推薦使用海星生物Hepa1-6細胞配套專用培養(yǎng)基
貨號：TCM-C734

(1) 開啟37℃水浴鍋。預熱完全培養(yǎng)基，提前將細胞從液氮中取出，放于-80℃冰箱，讓凍存管中液氮揮發(fā)。(2)?潔凈工作臺內準備15 mL離心管，加入5 mL預熱的完全培養(yǎng)基。(3)?從-80℃冰箱中取出細胞?？焖賹龃婀苤糜?7℃水浴鍋內，快速晃動，使凍存液迅速融化。注意: ① 融化過程必須晃動凍存管，保證凍存液融化均勻。晃動時應避免水沒過管蓋增加污染風險。

? ? ? ? ② 管內凍存液融化至只剩一個約2mm直徑的冰晶時，可停止水浴。繼續(xù)晃動凍存管至冰晶融化。

(4)?用75%酒精消毒凍存管表面。在潔凈工作臺內小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數次，轉移至預先準備的離心管內。用少量完全培養(yǎng)基洗滌凍存管1~2次，一并收集至離心管內。

(5)?250 g離心4 min。離心后去除上清。加入2 mL完全培養(yǎng)基，輕柔吹打細胞沉淀，充分吹散、混勻。（如有臺盼藍可取少量細胞懸液進行染色計數）

(6)?將細胞平均接種到1個T25培養(yǎng)瓶或底面積相當的培養(yǎng)容器中，加入足量完全培養(yǎng)基，搖勻細胞，將培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意:?整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內完成。

(7)?復蘇次日，觀察細胞狀態(tài)并換液。

注意:?細胞接種24 h內不應擾動。

Hepa1-6細胞傳代

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。(推薦傳代比例1:2-1:4，首次傳代建議1:2)

(1) 準備離心管、培養(yǎng)瓶以及無菌槍頭等，提前預熱完全培養(yǎng)基、胰酶、PBS。

細胞完全培養(yǎng)基(貨號TCM-C734)胰酶?0.25% Trypsin-0.04% EDTA（貨號: GUTP-R001，以下簡稱）

1×PBS（貨號: GUPB-R001，以下簡稱PBS）

(2) 抽走培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，加5mL PBS潤洗1-2遍，清除殘留培養(yǎng)基。

(3) 盡量吸干潤洗的PBS后加1mL胰酶，搖晃使胰酶均勻覆蓋瓶底，放置培養(yǎng)箱37℃消化。

(4) 消化時每隔1min拿出來觀察，鏡下可見細胞明顯回縮，輕拍培養(yǎng)瓶部分細胞開始脫落時立即加入3-4mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹落貼壁的細胞。

注意: 控制吹打力度輕柔，吹打次數不可過多，避免機械損傷

(5) 將細胞懸液轉移至離心管中，1000rpm，3min離心收集細胞。

(6) 在新的培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦5mL，T75推薦10-15mL）。

(7) 離心完成后，棄上清，加入適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，十字法或8字法混勻，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，注意培養(yǎng)瓶蓋透氣。

Hepa1-6細胞凍存

推薦使用海星一步凍存液（即用型、無血清、無需程序降溫）
貨號：GUCP-R201

(1) 待細胞生長至可傳代的密度，即可準備凍存。(2) 消化細胞，取少量細胞懸液計數。細胞懸液經250 g離心4 min。(3) 離心后去除上清，用適量4℃預冷的凍存液重懸細胞。將細胞按比例或數量分裝至凍存管中。一般凍存密度為(1.0~2.0)×10^6個/mL。注意:?細胞長時間在非培養(yǎng)條件下放置會嚴重影響細胞的狀態(tài)。如離心后用凍存液重懸計數，請將細胞放置于4℃冰箱內，以減弱細胞代謝，較好的保持細胞狀態(tài)。(4)?如使用海星一步凍存液，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“一步”凍存。如使用程序凍存液，需將凍存管放入提前預冷的程序降溫盒后放入-80℃冰箱。(5) 24小時后可將凍存管轉移到液氮進行長期保存。注意:?細胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h后盡快轉移至液氮中。

Hepa1-6細胞培養(yǎng)注意事項

(1)?培養(yǎng)時細胞碎片可能會比較多

如果在密度較大時傳代，碎片數量也隨之增加。碎片較多時，通過PBS潤洗和換液清除碎片。

(2)?細胞形態(tài)多變

這與細胞密度、實際培養(yǎng)條件和操作相關。Hepa1-6在低密度和高密度狀態(tài)下，形態(tài)有較大差異。低密度時細胞形態(tài)各異，呈多角形；高密度時細胞形態(tài)更均一，呈鋪路石狀。有少部分貼壁細胞呈發(fā)亮的球形，是正常現象。

(3)?Hepa1-6細胞貼壁弱，消化時間偏短，注意控制消化時間。

以上內容由海星生物提供 （hycyte.com）

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