蛋白從頭測(cè)序的樣本處理
從頭測(cè)序是一種不依賴于已知蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)的序列分析方法,它利用質(zhì)譜檢測(cè)到的兩個(gè)片段離子之間的質(zhì)量差來(lái)計(jì)算肽鏈上氨基酸殘基的質(zhì)量,進(jìn)而推斷多肽或蛋白的氨基酸序列。對(duì)于一個(gè)沒(méi)有相應(yīng)理論數(shù)據(jù)庫(kù)、或者新發(fā)現(xiàn)的蛋白/多肽來(lái)說(shuō),從頭測(cè)序就顯得十分重要。
進(jìn)行蛋白質(zhì)分析首先要制備合適的蛋白樣品。制備從頭測(cè)序的蛋白樣本應(yīng)從其含量、純度、保存以及運(yùn)輸?shù)确矫孢M(jìn)行考慮:(1)可以制備液體或凍干粉樣品,保證樣品含量在20 -100 ug左右,最好不要低于20ug;(2)蛋白純度應(yīng)盡可能高,如果是液體樣品,應(yīng)保證緩沖液中不含高鹽和SDS等去垢劑;(3)制備好的樣品可于室溫或4℃密封無(wú)菌保存;(4)運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)注意液體樣品通過(guò)干冰運(yùn)輸或進(jìn)行真空/冷凍抽干后冰袋運(yùn)輸,固體樣本可直接使用冰袋運(yùn)輸。
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