單線態(tài)氧熒光探針(SOSG、ABDA、DPBF、TEMP)
SOSG
SOSG單線態(tài)氧熒光探針對(duì)于1O2具有高度選擇性;與其它熒光或者化學(xué)發(fā)光單線態(tài)氧檢測(cè)試劑不同,它對(duì)氫氧自由基(?OH)和超氧離子自由基(?O2-)無任何明顯的響應(yīng)。SOSG單線態(tài)氧熒光探針 發(fā)出與熒光素相似的綠色熒光,最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別約為 504/525 nm。單線態(tài)氧熒光探針不可穿透細(xì)胞。
圖1.SOSG的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及與1O2相互作用時(shí)SOSG-EP的形成,導(dǎo)致熒光輸出的激活。
ABDA
ABDA是一款測(cè)定單線態(tài)氧的指示劑,具有比9,10-蒽二基-二-二丙酸更好的特性。這一水溶性的蒽衍生物與單線態(tài)氧反應(yīng),光漂白生成對(duì)應(yīng)的內(nèi)過氧化物,這一反應(yīng)通過分光光度法記錄400nm處光密度的降低來監(jiān)測(cè)。熒光:λex 380 nm;λem 407 nm 在 0.1 M 磷酸鹽 pH 7.0 中。
使用案例
圖2.(a) ABDA與1 O 2發(fā)生1 O 2和化學(xué)反應(yīng)示意圖。(b) ABDA在存在5、10、20和50 mM PPET3的情況下在不同暴露時(shí)間內(nèi)的吸收光譜變化。(c) ABDA在378nm處的歸一化吸光度與含有不同濃度PPET3的溶液中的暴露時(shí)間的關(guān)系圖。(d) 在有或沒有白光照射的情況下,以一系列濃度與PPET3一起孵育的HeLa細(xì)胞的相對(duì)細(xì)胞活力。
DPBF
?DPBF(1,3-Diphenylisobenzofuran) 是一種單線態(tài)氧指示熒光探針,對(duì)單線態(tài)的氧(O2) 具有高特異性,可形成內(nèi)過氧化物并分解成為 1,2-dibenzoylbenzene。1,3-Diphenylisobenzofuran 可以用于檢測(cè)活性氧 (ROS) 的生成。一旦與單線態(tài)氧(1O2)結(jié)合,DPBF被不可逆氧化,紫外-可見光(410nm)處的吸收強(qiáng)度迅速降低。DPBF的激發(fā)波長(zhǎng)是670nm。
圖3.a 在DMF中照射ADCPPa后,DPBF的光分解為1 O 2(監(jiān)測(cè)DPBF在415nm處的最大吸收)。b ADCPPa和亞甲藍(lán)的線性擬合曲線比較。
TEMP
TEMP(2,2,6,6-四甲基-4-哌啶酮 鹽酸鹽),具備穩(wěn)定性捕獲劑的產(chǎn)品特點(diǎn)。TEMP基線無TEMPO的干擾EPR信號(hào),穩(wěn)定性更好。同時(shí)鹽酸鹽結(jié)構(gòu)增強(qiáng)了捕獲劑的水溶性,避免沉淀的析出。單線態(tài)氧分子和捕獲劑TEMP本身呈EPR沉默 (EPR-silent),TEMP捕獲單線態(tài)氧后,可形成穩(wěn)定的氮氧自由基TEMPO,通過對(duì)TEMPO的EPR信號(hào)分析并結(jié)合反應(yīng)進(jìn)程,可獲知單線態(tài)氧的生成的速率和濃度變化。
使用案例
圖4.使用光敏劑Rose Benga (1 mM) 光照后,檢測(cè)單線態(tài)氧。TEMP終濃度100 mM,PBS緩沖液 (PH 7.5) 中進(jìn)行檢測(cè)。
備注:
a.由于躍遷高度禁阻,基態(tài)氧分子吸收光不能直接產(chǎn)生1O2,可以通過光敏化法、微波放電法和化學(xué)方法得到。
b. PBS緩沖液可更換為純水等其他溶劑,實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自行選擇。