植物組織培養(yǎng)的條件

1、植物組織培養(yǎng)的整個操作和培養(yǎng)過程都要求在嚴格無菌條件下進行，無菌是組織培養(yǎng)成功的首要條件。操作過程在接種室內(nèi)超凈工作臺上進行；外植體材料要進行表面消毒；配制的培養(yǎng)基要進行高壓滅菌消毒。

2、溫度處理操作和培養(yǎng)過程都是在恒溫條件下進行，一般在23—27℃之間，熱帶植物可偏高些，脫毒植物需要高溫處理。

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3、光照處理植物的器官必須有光，某些植物器官的生成是在無光條件下，但它的生長和發(fā)育必須有光。莖尖的生長及試管苗的繼代增殖以3000-5000lux光照強度適宜；生根試管苗以3000lux適宜。光質(zhì)對愈傷組織誘導、增殖、器官的分化有不同的影響。光周期誘導一般是16h，黑暗是12h，對光周期敏感植物要掌握光照時間，否則影響植物的分化。

4、培養(yǎng)基的酸堿度因植物的種類不同而有區(qū)別，大多數(shù)植物要求在5.8之間，喜酸性培養(yǎng)的植物要求的酸堿度較嚴格。

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如何確定組培室規(guī)模

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由于組培苗生產(chǎn)從進瓶到出瓶都是在無菌條件下完成，因此建設一個組培工廠生產(chǎn)時通常以購買多少超凈工作臺來衡量。原則上，根據(jù)繁殖品種的不同，一個超凈工作臺可按年生產(chǎn)15-20萬苗計算。如規(guī)劃一個生產(chǎn)量達500萬株的組培室，需配備25-30個無菌操作位置。根據(jù)接種工熟練度程度、培養(yǎng)周期長短、污染比例大小等原因，具體估算也是有彈性的。

另外一種計算方法是根據(jù)市場需求規(guī)律，按最高供應季節(jié)需求量除以月生產(chǎn)量來確定必須購置的無菌工作臺數(shù)量。

當工作臺數(shù)量確定后，才能設計無菌工作臺的擺放方式，計算出接種室的需求面積。按日生產(chǎn)組培苗瓶數(shù)及培養(yǎng)期，結(jié)合周轉(zhuǎn)期計算需要的培養(yǎng)架數(shù)量，以此為基礎很容易就可以計算出培養(yǎng)室需求面積。

一般一臺無菌工作臺，需配備培養(yǎng)架7-10個（1.25mx0.5m×1.8m×6層），無菌操作室與培養(yǎng)室的面積比例為1：4，或者根據(jù)培養(yǎng)架數(shù)量確定培養(yǎng)室面積，一般每個培養(yǎng)架需要1.5個平米。當然具體還需要考慮到通道，搬運等情況，可根據(jù)自身的情況進行微調(diào)以及后期的擴展。

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圍繞組培工廠建設，其他必備的配套設備及操作用具購置的數(shù)量，應以每個無菌工作臺的需求量計算，解剖刀、鑷子、刀片等常用工具還要有充足的備用量。試管苗出瓶、移栽需要安排在過渡培養(yǎng)溫室或大棚內(nèi)進行。

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現(xiàn)代的組培工廠還需要建有種質(zhì)資源保存圃、原原種、原種圃、生產(chǎn)性栽培展示區(qū)等，其面積的大小應根據(jù)不同植物的種類來確定，當然這種都是大規(guī)模生產(chǎn)企業(yè)考慮的。

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組建組培室前的幾點要素

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1、電壓的容量要預留充足

建一個組培室所需的設備投資較多，要相應面積的房舍，操作、滅菌、培養(yǎng)等過程。用電量比較大，如果達不到預計的產(chǎn)苗量或造成銷售困難，商業(yè)組培室就會陷于被動。從正式建設到產(chǎn)品銷售，這段時間一般需要1年左右。

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2、考察市場容量和發(fā)展?jié)摿?/p>

作為一個商業(yè)性種苗經(jīng)營者，在決心采用組培培育種苗之前，必須對其優(yōu)點和存在的問題做好認真細致的調(diào)查研究工作。

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對當前此類種苗進行市場分析，預估其市場容量以及發(fā)展?jié)摿?，親自實地考察一些組培企業(yè)，最好能親自實踐一段時間或聘請有實踐經(jīng)驗的專家擔技術(shù)顧問，然后再決定是否投資，如果市場有限，那么耗資巨大地建立組培室，恐怕會成為不合算事情，這在創(chuàng)業(yè)時將承擔過大的風險。

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3、根據(jù)市場確定組培室規(guī)模

在對市場進行考察和分析后，根據(jù)市場容量和發(fā)展?jié)摿Υ_定組培室的規(guī)模，也就是生產(chǎn)規(guī)模，可以提前預留擴展的空間，但切忌“好大貪全”，盲目擴大組培室規(guī)模，導致資金投入過大。

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4、根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模制定生產(chǎn)計劃

首先要根據(jù)市場需求和移栽時間，制定全年植物組織培養(yǎng)的全過程，在制定生產(chǎn)計劃時要注意以下幾點：

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4.1 對所生產(chǎn)的植物的增殖率、生根率和移栽成活率應做出切合實際的估算；

4.2 要掌握植物組織培養(yǎng)全過程的技術(shù)儲備；

4.3 要掌握各種組培苗的適宜生根、移栽時間和生產(chǎn)技術(shù)環(huán)節(jié)。

4.4 已成立組培室，除科研需求外，在生產(chǎn)上，應考慮如何用最小的投資，取得最大的經(jīng)濟效益。?一定要結(jié)合市場的需求情況，形成一定生產(chǎn)規(guī)模，降低成本，提高利潤，才能提高經(jīng)濟效益。

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首先應具有熟練掌握組培技能的專業(yè)人員。操作工轉(zhuǎn)接苗操作熟練，污染率小，提高成品率；

其次應減少設備投資，延長使用壽命，降低器皿消耗，如：組培中的蔗糖可用食用糖代用，只要所用水中含鹽量不高，配制培養(yǎng)基時可用自來水、雨水代替無離子水或蒸餾水。

培養(yǎng)室盡量利用自然光和自然溫度，從而節(jié)約電力開支。另外，在保證原有良種特性的基礎上，盡量提高繁殖倍數(shù)，提高生根率和移栽成活率。

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因此現(xiàn)代化組培工廠的建設，需要認真規(guī)劃、精細計算、合理投資，使之既有系統(tǒng)性又有實用性，這樣才能充分發(fā)揮最大的生產(chǎn)潛力。在市場競爭中，盡量降低成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量和品種的可靠性。

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日常除了生產(chǎn)之外，還要積極研究新品種，多做技術(shù)積累，積極延展組培產(chǎn)業(yè)，保證組培生產(chǎn)的延續(xù)性。

1、用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基迄今不下幾十種。歸納起來，任何一種培養(yǎng)基均有以下幾部分組成：無機鹽（大量元素、微量元素），有機化合物（蔗糖、維生素類、氨基酸、核酸及其他水解化合物），鐵鹽螯合劑，植物激素。

植物激素的純度對于組織培養(yǎng)的成功至關重要。接種的外植體，其分化速度（長芽）和分化方向（長根），均取決于所加激素的種類、數(shù)量及比例。簡言之，主要是生長素和細胞分裂素的加入量以及兩者的比例。一般生長素類包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸；細胞分裂素類包括激動素、芐基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。

培養(yǎng)基中的糖類主要是蔗糖，少數(shù)情況下使用葡萄糖。大量生產(chǎn)可使用蔗糖。糖在培養(yǎng)基中的作用是提供碳源，同時用于維持滲透平衡，瓊脂是固體培養(yǎng)基中的成分，作為固化劑支持。培養(yǎng)物在培養(yǎng)基的成本消耗中，瓊脂占有相當大的比例，培養(yǎng)基中瓊脂的加入量一般為4-7g。

2、在組織培養(yǎng)生產(chǎn)中，培養(yǎng)基的制備對母液的需求量相當大，需一批一批地連續(xù)配制。為簡化配制過程，提高工作效率，一般將各種所需藥品先配制成高濃度溶液，貯備起來。到配制培養(yǎng)基時，按要求的濃度取一定量稀釋即可；我們稱這些高濃度的溶液為貯備液，習慣上稱母液。

制備母液時，先將所有藥品分成幾組，每組藥品制成一種母液。分組的原則是同組藥品混合溶解時不會發(fā)生質(zhì)的變化，也不產(chǎn)生沉淀。一般將藥品分成5組：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機化合物類和植物激素。其中植物激素母液有若干種，每種激素都先制成1mg/ml的溶液。

母液制備注意事項

1、藥品稱量要盡可能準確。大量元素用百分之一（千分之一）天平稱取，而微量元素、有機物類、植物激素等，則必須使用萬分之一的天平。

2、母液配制完畢注入試劑瓶后，一定要標明母液的名稱、序號、濃度和配制日期等。

3、配制好的母液應放置在冷藏箱內(nèi)保存，尤其是有機物和激素類。

培養(yǎng)基的配制

1、將用于配制培養(yǎng)基的容器洗凈，加入培養(yǎng)基總量四分之三的蒸餾水，放入所需的瓊脂和糖，然后加熱溶解。在加熱過程中應不斷地攪拌，以避免瓊脂粘鍋或溢出。

2、待瓊脂和糖完全溶解后，按順序加入各貯備液以及所需的植物激素。

3、用蒸餾水定容補充由于加熱蒸發(fā)所損失的體積。

4、用蒸餾水調(diào)整pH。

5、通過漏斗或下口杯將培養(yǎng)基注入組組織培養(yǎng)容器內(nèi)，注入量為瓶容積的十分之一左右。灌裝要迅速，盡可能避免培養(yǎng)基粘在瓶壁上，且應在培養(yǎng)基未冷卻之前灌裝完畢。

6、用封口膜或含透氣膜的塑料蓋將瓶口或試管口封嚴。

7、將封裝好的組織培養(yǎng)容器碼放在高壓滅菌鍋內(nèi)。于105Pa壓力、121℃下滅菌20分鐘。如使用小型手提式滅菌鍋時，一定要注意，當鍋內(nèi)壓力上升時，先反復放氣數(shù)次，將鍋內(nèi)空氣排盡以后，再計算時間，否則達不到高壓滅菌的效果。

8、對于一些受熱易于分解的物質(zhì)，如維生素類，可采取先過濾滅菌的方法。待培養(yǎng)基滅菌后，尚未冷卻之前（40℃左右）加入并搖勻。經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基可在室溫下存放3-5天，或在冷藏箱內(nèi)存放10天左右，最好在短時間內(nèi)用完。