完全弗氏佐劑(CFA)使用建議及應(yīng)用說明
弗氏佐劑旨在提供釋放刺激強(qiáng)細(xì)胞所必需的抗原持續(xù)的免疫反應(yīng)。CFA的使用應(yīng)負(fù)責(zé)任且謹(jǐn)慎以避免或盡量減少過度炎癥。對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用程序,CFA通常僅用于初始免疫,而IFA是選擇后續(xù)免疫接種。
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完全弗氏佐劑(CFA)是一種油包水每毫升含1毫克熱殺干乳劑結(jié)核分枝桿菌。CFA和IFA使用最多的佐劑廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)。完成弗氏佐劑在實(shí)用的獸醫(yī)疫苗接種。CFAVax由礦物油和乳化劑的混合物組成以85%v/v油和15%v/v乳化劑的比例。每10個(gè)mL CFA小瓶含有10 mg分枝桿菌。
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重要的是,CFAVax不是預(yù)先形成的乳液因此它必須與相等體積的抗原水溶液,隨后乳化在使用之前。乳化劑是單油酸曼尼酯由甘露醇作為親水殘基組成的酯和油酸(不飽和C18脂肪酸)作為疏水部分。即使油的作用機(jī)制乳液仍然鮮為人知,一些證據(jù)建議對(duì)NOD2進(jìn)行部分要求。此外,這些乳液在注射,從而在壞死細(xì)胞死亡也可能是它們的佐劑活動(dòng)免疫反應(yīng)顯著增強(qiáng)分枝桿菌成分的存在吸引巨噬細(xì)胞和免疫細(xì)胞注射CFA主要誘導(dǎo)Th1應(yīng)答可引起肉芽腫和嚴(yán)重炎癥接種部位的反應(yīng)。
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艾美捷完全弗氏佐劑(CFA)#OZB-CFA0100啟動(dòng)前的建議:
接種物應(yīng)無外來微生物污染在與推薦使用佐劑。含有完全弗氏佐劑的注射劑應(yīng)皮下注射:建議將將含有佐劑的接種物分成若干部分在小鼠或大鼠中每個(gè)部位注射超過0.1毫升,0.25毫升每個(gè)兔子的位置。如果在進(jìn)行這些操作時(shí)導(dǎo)致皮膚壞死指導(dǎo)方針,未來的注射應(yīng)該間隔更遠(yuǎn)。
1.使小瓶渦旋以重新懸浮分枝桿菌。
2.在3毫升魯爾膠中制備1毫升CFAVax佐劑注射器
3.在鹽水緩沖液或磷酸鹽緩沖液中稀釋抗原混合物最終免疫原濃度為10-100μg/100μL(足以免疫小鼠、大鼠和兔子)。
4.在3毫升魯爾鎖式塑料注射器中制備1毫升抗原
5.形成乳液:
a.使用雙端鎖定連接兩個(gè)注射器連接器
b.來回按壓注射器筒,轉(zhuǎn)移內(nèi)容物從一個(gè)注射器到另一個(gè)。白色乳液應(yīng)該立即形成
c.混合5至10分鐘:產(chǎn)生穩(wěn)定的乳液
d.所得乳液應(yīng)呈現(xiàn)白色,穩(wěn)定落入水中時(shí)不應(yīng)散開
注:對(duì)于較小的體積,可以通過以下方式進(jìn)行長時(shí)間混合有力地吸吮或渦旋。對(duì)于較大的體積,請(qǐng)使用紙巾均化器以形成乳液。
6.在連接之前,分離注射器并排出空氣針(小鼠或大鼠21g;兔子19g)
7.根據(jù)下表向動(dòng)物體內(nèi)注射;這個(gè)體積取決于注射部位。
8.有必要將多個(gè)注射部位隔開一段距離足以避免炎性病變合并。
注:弗氏佐劑的優(yōu)先給藥途徑應(yīng)為皮下,因?yàn)樗茐男暂^小??梢允褂闷渌肪€:肌內(nèi)、皮內(nèi)或腹膜內(nèi)。
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完全弗氏佐劑(CFA)應(yīng)用:
與引發(fā)Th2反應(yīng)的IFA相反,CFA主要誘導(dǎo)Th1反應(yīng)。分枝桿菌成分在注射部位吸引巨噬細(xì)胞和免疫細(xì)胞參與強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。弗氏佐劑旨在提供刺激強(qiáng)持續(xù)免疫反應(yīng)所必需的抗原的持續(xù)釋放。對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用,CFA通常用于初始免疫,而IFA是后續(xù)免疫的首選佐劑。
推薦用于:刺激Th1反應(yīng),初始免疫,抗體產(chǎn)生。
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SC =SC = Subcutaneous, IM = Intramuscular, ID = intradermal, IP = intraperitoneal,
IV = IV = intravenous, N.R. = not recommended, N.A. = not acceptable
弗氏推薦量每個(gè)注射途徑的佐劑/抗原乳液不同的動(dòng)物種類(改編自Hendriken CFM et Hau J.,2003,載于《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)手冊(cè)》卷I) 。