麥胚凝集素（WGA）是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素。它是目前研究多、應(yīng)用廣泛的一類凝集素。由于WGA與糖綴合物結(jié)合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標(biāo)記細(xì)胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。WGA的糖結(jié)合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列，即幾丁質(zhì)酶有關(guān)。每個(gè)單體包含兩個(gè)相同的非相互作用的結(jié)合位點(diǎn)，它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補(bǔ)。在所檢測(cè)的單糖中，只有GlcNAc與WGA結(jié)合。甘露聚糖不結(jié)合，而GalNAc只能弱結(jié)合。WGA與含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重復(fù)序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的內(nèi)部GlcNAc殘基具有高親和力結(jié)合。N-乙酰神經(jīng)氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復(fù)雜的糖類特異性模式，可用于復(fù)雜碳水化合物的結(jié)構(gòu)分析。iFluor 555小麥胚芽凝集素（WGA）綴合物可能是亮的WGA綴合物。它表現(xiàn)出了iFluor的明亮和紅色熒光。iFluor 555小麥胚芽凝集素（WGA）綴合物與唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖殘基結(jié)合，如AF555 WGA結(jié)合物那樣。

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?iFluor 555小麥胚芽凝集素(WGA)綴合物適用儀器

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熒光顯微鏡

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激發(fā)：? ? ? ? ? ?Cy3/TRITC濾波片

發(fā)射：? ? ? ? ???Cy3/TRITC濾波片

推薦孔板： ???黑色透明

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iFluor 555小麥胚芽凝集素(WGA)綴合物實(shí)驗(yàn)方案

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溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制?

iFluor?555 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲(chǔ)備液 (200X)

將 500 μL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲(chǔ)存，或在 -20 °C 下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

工作溶液配制?

iFluor 555-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲(chǔ)備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細(xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細(xì)胞的推薦起始濃度為 5-10 μg/mL。

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操作步驟

1.活細(xì)胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.2 添加 100 μL iFluor 555-WGA 工作溶液。
1.3 將細(xì)胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
1.5 使用 ?Cy3/TRITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

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2.固定細(xì)胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細(xì)胞。
注意：對(duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議在沒(méi)有透化步驟的情況下進(jìn)行染色。固定后透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。
2.2 添加 100 μL iFluor 555-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細(xì)胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次。
2.5 使用 ?Cy3/TRITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細(xì)胞。

圖示