打質(zhì)譜鑒定泛素化位點(diǎn)
泛素(Ubiquitin,Ub)是一種小分子量多肽,在相關(guān)酶的作用下,Ub能通過共價鍵連接在底物蛋白或目標(biāo)蛋白上,這一過程就稱為蛋白泛素化修飾,是真核生物中一種常見的蛋白翻譯后修飾。根據(jù)蛋白所連接的泛素分子的多少,可以將泛素化分為單泛素化和多泛素化,根據(jù)Ub所在的位置又將多泛素化分為多聚泛素化和線形多聚泛素化。因此,一個蛋白質(zhì)可能有多個泛素化修飾位點(diǎn),且每個位點(diǎn)可能連接不止有一個泛素分子。
發(fā)生泛素化修飾的蛋白肽段或氨基酸,在分子質(zhì)量上會發(fā)生相應(yīng)的增加,對于一個已知的蛋白或肽段,其分子質(zhì)量是已知的,若其發(fā)生了泛素化修飾,則分子質(zhì)量會增加一個或多個泛素分子的質(zhì)量,質(zhì)譜能檢測到這種分子質(zhì)量的變化,從而確定發(fā)生泛素化修飾的氨基酸位點(diǎn)。質(zhì)譜直接檢測的是酶解后的蛋白肽段,若檢測到的肽段發(fā)生了分子質(zhì)量的增加,且該肽段只含一個氨基酸,那么就能直接確定泛素化的位點(diǎn);若該肽段含有多個氨基酸,那么需要進(jìn)行二級質(zhì)譜分析進(jìn)一步確認(rèn)發(fā)生泛素化修飾的氨基酸。
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