Kate張？是誰？

Kate張，人稱張老板，歐易生物單細胞事業(yè)部元老之一。率領一眾須眉和巾幗，披荊斬棘，鏖戰(zhàn)大江南北，短時間內(nèi)為歐易搭建了完善的單細胞實驗體系，替歐易生物在單細胞領域闖下“赫赫威名”。

在Kate張的帶領下，歐易單細胞天團至今已經(jīng)成功處理樣本上千例，組織類型覆蓋數(shù)十種。

樣本解離作為單細胞實驗的第一道門戶，結(jié)果質(zhì)量直接決定整個項目的成功與否，其重要性不言而喻。但是很多老師和同學在開展單細胞實驗伊始，總是會碰到各種各樣的問題。

為了幫助大家制備出高質(zhì)量的單細胞懸液，小編專門采訪了Kate張，就單細胞懸液的制備中那些讓人“頭疼”的問題，為大家一一解答。

Q1

問：達到怎樣的要求才算高質(zhì)量的單細胞懸液呢？

答：主要為以下幾個判斷標準：在總細胞量高于105的前提下

1.鏡檢結(jié)果顯示紅細胞占比低于4%；

2.碎片/其他雜質(zhì)占比低于4%；

3.細胞團數(shù)量占比低于4%；

4.細胞活性高于85%，并能半小時內(nèi)保持活性不變。

Q2

問：組織需要剪非常碎嗎？一般剪碎到什么程度比較好呢？

答：是的，一般組織剪得越碎，在消化過程中與酶解液接觸越充分，越利于消化。我們一般將組織剪碎至1-2mm3的糜狀，如下圖1

Q3

問：一般細胞的離心力在多少最佳？

答：我們正常離心力在300g左右，有時會根據(jù)細胞具體情況作調(diào)整。

Q4

問：如果細胞沉淀非常紅，可以多加點紅細胞裂解液嗎？

答：一般情況下不建議多加裂紅液。一般紅細胞裂解液有推薦的紅細胞裂解液/細胞懸液的體系，增大體系可能影響到細胞活性。所以，紅細胞裂解不干凈，建議增加裂紅時間，或增加裂紅次數(shù)。

Q5

問：假設制備出的單細胞，細胞量比較多，但是活性不高，如何提高活性呢？

答：可以嘗試一下去死細胞試劑盒，根據(jù)我們操作經(jīng)驗，細胞活性在60%-75%區(qū)間時去死細胞提高活性的效果較好。

Q6

問：假設細胞懸液中碎片比較多，要怎么去除呢？

答：建議嘗試以下3點去除：

1.降低離心力，多次洗滌，或密度梯度離心；

2.用血清重懸細胞，離心洗滌，可去除部分碎片；

3.去碎片試劑盒，根據(jù)我們操作經(jīng)驗，大塊的碎片去除效果較好。

Q7

問：如果細胞懸液中有比較大的結(jié)團，要怎么去除呢？

答：可以輕柔地多吹打幾次，無法吹開可用40μm細胞篩過濾去除。

Q8

問：倘若細胞消化下來后，還沒進行處理細胞活性就往下降了，這要怎么辦？

答：根據(jù)我們的經(jīng)驗，可能有以下2種可能。

1.可能與解離體系有關，建議嘗試加入一些輔助酶，例如：DNA酶，透明質(zhì)酸酶等輔助消化，減少酶解液對細胞狀態(tài)的影響；

2.消化過程是否太過劇烈，例如：旋轉(zhuǎn)消化轉(zhuǎn)速過高或震蕩消化震蕩劇烈都有可能對細胞狀態(tài)造成影響。

Q9

問：要是鏡檢細胞用的臺盼藍，鏡檢下不知道有一些是不是細胞，這個要怎么判斷呢？

答：建議嘗試用熒光染料對細胞進行染色，再行鏡檢，對比明場與熒光即可判斷。

Q10

問：為什么沒染色的時候細胞形態(tài)挺好的，臺盼藍一染色就有挺多片狀的碎片??？

答：可能是因為臺盼藍里的碎片，建議將臺盼藍過一下0.22μm的過濾器之后再鏡檢。

今天的解離十問十答欄目就結(jié)束啦，不知道有沒有幫助到大家解除疑惑呢？

解離經(jīng)驗分享視頻，請戳：https://www.bilibili.com/video/BV1Ti4y1b7Yt觀看。

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文章源自歐易生物公眾號