病毒性心肌炎動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】病毒性心肌炎是由于病毒感染所引起的心肌局限性或彌漫性病變。

【造模方法】實(shí)驗(yàn)小鼠柯薩奇病毒心肌炎模型:小鼠選用腹腔注射的方法。毒株: CBV3m,CBV3o。病毒滴度:3x10pfu/mlhela細(xì)胞傳代。動(dòng)物:60只6~8周齡的 BALB/c雄性小鼠，二級(jí)清潔實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)操作:

1.實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)A組:BALB/c小鼠20只，每只小鼠腹腔注射0.5ml的3x10pfu/ml的 CBV3o;實(shí)驗(yàn)B組:BALB/c小鼠20只，每只小鼠腹腔注射0.5ml的3x10pfu/ml的CBV3m實(shí)驗(yàn)C組對(duì)照組:BALB/c小鼠20只，每只小鼠腹腔注射0.5ml的無血清e(cuò)agle’s液。

2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 對(duì)各組動(dòng)物的一般生活狀況、活動(dòng)、毛色、飲水、進(jìn)食、排便和死亡等進(jìn)行連續(xù)觀察并作記錄。在實(shí)驗(yàn)的第2天、4天、6天、8天和10天，解剖2~5只存活的實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組小鼠，并獲取心臟、胰腺、肝臟等標(biāo)本。

3.病理 對(duì)獲取的小鼠心肌、胰腺等標(biāo)本作常規(guī)病理切片,光鏡下進(jìn)行病理診斷。

4.病毒滴度測(cè)定 心肌等組織標(biāo)本,0lmol/1PBS洗2次，組織勻漿器將其破碎，離心2000r/min,15分鐘，-70℃保存直到應(yīng)用。

【模型特點(diǎn)】實(shí)驗(yàn)性病毒性心肌炎感染模型復(fù)制比較困難，國(guó)外通常選用小鼠、田鼠、狒狒奇病內(nèi)楊英珍將新生SD大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng),并使其感染柯薩奇病毒B感染后心肌細(xì)胞停止搏動(dòng),變暗成堆,有折光并皺縮，培養(yǎng)液中心肌學(xué)明顯升高?？滤_奇病毒B染的鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)能作為一種體外模型,用來從事研究病毒性心肌炎的生理、病理生理、生化等改變。

(注意事項(xiàng)】病毒操作需要在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室、生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。在制造小鼠心肌炎模型時(shí)建議選擇CBV3m,此株病毒致小鼠心肌炎的發(fā)病率高。

【應(yīng)用范圍】用CBV3m和CBV3o感染BALB/c實(shí)驗(yàn)小鼠，常規(guī)病理法觀察兩株病毒致小鼠心肌炎的情況。結(jié)果BV3m和CBV3染組小鼠心肌病毒滴度的峰值出現(xiàn)的間基本相同CBV3m的滴度較高;CBV3m感染組小鼠死亡率明顯高于CBV3o;兩株病毒小鼠心肌炎的發(fā)病率分別為76%和17%。CBV3m和CBV3o致小鼠心肌炎的差異明顯。

【模型評(píng)估】

1.各組小鼠心肌組織病毒滴度的測(cè)定 小鼠感染CBV3o后第4天，心肌細(xì)胞內(nèi)可檢測(cè)到病毒存在，但滴度較低,第8天后心肌組織內(nèi)幾乎檢測(cè)不到病毒的存在;CBV3m感染小鼠第4天至第10天測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)的病毒滴度，病毒滴度高峰出現(xiàn)在第6~8天，此時(shí)的病毒滴度明顯高于CBV3o感染的小鼠。到第10天有少量標(biāo)本病毒滴度仍為陽性，對(duì)照組小鼠心肌病毒滴度均為陰性。

2.各組小鼠死亡情況60只CBV3o感染組小鼠有9只在實(shí)驗(yàn)中自然死亡，死亡率為15%。而90只CBV3m感染組小鼠有66只自然死亡，死亡率為73%。正常對(duì)照組小鼠無一例死亡。

3.各組小限體征及心肌病理改變的情況 CBV3o感染小鼠從第3天開始有個(gè)別小鼠

有松毛、后肢癱等表現(xiàn)，拒食、稀便現(xiàn)象較為多見;常規(guī)病理檢查顯示從第6天開始有少數(shù)小鼠心肌有變性、炎癥和壞死等病理改變，程度較輕，病灶小而散在。實(shí)驗(yàn)工組小鼠心肌病變發(fā)生率平均為17%。CBV3m感染組小鼠從第3天開始絕大多數(shù)有松毛、雙后肢癱、拒食和稀便等表現(xiàn)。病理檢查顯示從第4天開始小鼠心肌有變性、炎癥、壞死、心包炎、鈣化等病理改變，且多數(shù)小鼠心肌病變程度較重，部分小鼠心肌有彌漫性炎癥、壞死出現(xiàn)。在實(shí)驗(yàn)Ⅱ組小鼠心肌病理診斷中，76%的小鼠心肌有上述病理改變。對(duì)照組小鼠未見有任何病理改變。

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