基因組 DNA 分離丨Worthington核糖核酸酶A
胰腺核糖核酸酶?(RNase)?是一種核糖核酸內(nèi)切酶。它催化核苷酸的?5'-核糖和與相鄰嘧啶核苷酸的?3'-核糖相連的磷酸基團(tuán)之間的磷酸二酯鍵的斷裂。這種切割形成?2',3'-環(huán)狀磷酸鹽,然后水解成相應(yīng)的?3'-核苷磷酸鹽。
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RNase?在反芻動(dòng)物胰腺中的含量最高(Barnard 1969)。結(jié)晶酶的主要成分是?RNase A;一個(gè)次要成分是?RNase B。RNase B?是?RNase A?的糖基化形式(Beintema et al. 1976)。
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艾美捷Worthington?核糖核酸酶A特異性:
RNase A?對(duì)嘧啶核苷鍵具有特異性(Volkin?和?Cohn 1953)。據(jù)信該反應(yīng)分兩步進(jìn)行。在步中,3',5'-磷酸二酯鍵被裂解,同時(shí)生成?2',3'-環(huán)狀磷酸二酯中間體。第二步,環(huán)狀磷酸二酯水解成3'-單磷酸基團(tuán)。步對(duì)于底物的含氮堿基是非特異性的;然而,第二步對(duì)于末端為?2',3'-環(huán)狀磷酸的嘧啶核苷酸是特異的。RNase B?對(duì)環(huán)狀胞苷酸和酵母?RNA?具有與?RNase A?相同的特異性(Plummer?和?Hirs 1963)。RNase A?顯示出對(duì)較大底物的偏好(Nogués等,?1995)。
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該酶在胞苷殘基處的裂解速度是尿苷殘基處的兩倍(Richards?和?Wyckoff 1971)。已發(fā)現(xiàn)?Thr45?通過(guò)與嘧啶堿基形成氫鍵和在空間上排除嘌呤堿基對(duì)介導(dǎo)嘧啶特異性最重要(del Cardayré?和?Raines 1994)。Asp83?的側(cè)鏈對(duì)于穩(wěn)定含尿苷底物裂解過(guò)程中的過(guò)渡態(tài)很重要;該殘留物對(duì)胞苷裂解的動(dòng)力學(xué)沒(méi)有影響(del Cardayré?和?Raines 1995)。
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艾美捷Worthington?核糖核酸酶A的7個(gè)應(yīng)用:
1.DNA分離過(guò)程中的RNA去除
2.RNA序列分析
3.RNase?保護(hù)試驗(yàn)
4.RNA定量或作圖
5.純化質(zhì)粒?DNA
6.基因組?DNA?分離
7.分子量標(biāo)記
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艾美捷Worthington核糖核酸酶A參考文獻(xiàn):
1.Admed, A., Schaffer, S., and Wetlaufer, D.: Nonenzymic Reactivation of Reduced Bovine Pancreatic Ribonuclease by Air Oxidation and by Glutathione Oxidoreduction Buffers , J Biol Chem 250, 8477, 1975
2.Ahmad, F.: Free Energy Changes in Denaturation of Ribonuclease A by Mixed Denaturants. Effects of Combinations of Guanidine Hydrochloride and One of the Denaturants Lithium Bromide, Lithium Chloride and Sodium Bromide , J Biol Chem 259, 4183, 1984
3.Ahmad, F.: Free Energy Changes in Ribonuclease A Denaturation. Effect of Urea, Guanidine Hydrocholoride and Lithium Salt, J Biol Chem 258, 11143, 1983
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Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。
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Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國(guó)代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。