? ? ? 百螢鈣黃綠素藍(lán)，AM是鈣黃綠素藍(lán)的細(xì)胞滲透性版本。進(jìn)入活細(xì)胞后，弱熒光鈣黃綠素,AM被水解成鈣黃綠素，其激發(fā)/發(fā)射最大值與鈣黃綠素藍(lán)、DAPI、HOECHST和AMCA相似。這種與典型的綠色和紅色熒光團(tuán)（如FITC、TMR和德克薩斯紅）的特殊光譜分離為多重實(shí)驗(yàn)提供了額外的選擇。

1.百螢鈣黃綠素,AM適用儀器

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流式細(xì)胞儀

Ex(nm) ：? ? ? ??350/405納米激光

Em(nm)：? ? ?? 450/40納米過(guò)濾器

儀器規(guī)格?：? ???Pacific Blue Channel

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?熒光顯微鏡

Ex(nm) ：? ? ? ?DAPI過(guò)濾器集

Em(nm)： ??????DAPI過(guò)濾器集

推薦孔板： ????黑壁/清底

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?熒光酶標(biāo)儀

Ex(nm)：? ? ? ? 360

Em(nm) ：???????450

Cutoff ：? ? ? ? ? 420

推薦版塊： ?????黑壁/清底

儀器規(guī)格： ?????底讀模式

2.?百螢鈣黃綠素,AM工作溶液的制備

? ? ?在您選擇的緩沖液（例如Hanks和Hepes緩沖液）中制備1至10μM的鈣黃綠素藍(lán)，AM工作溶液。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，建議使用終濃度為4至5μM的鈣黃綠素藍(lán),AM溶液。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

注意：如果您的細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，則可以將丙磺舒（1-2.5mM）或磺吡酮（0.1-0.25mM）添加到工作溶液中以減少去脂化指示劑的泄露。

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3.?百螢鈣黃綠素,AM樣本實(shí)驗(yàn)方案

（1）準(zhǔn)備用于成像的細(xì)胞；

（2）去除細(xì)胞培養(yǎng)基并用無(wú)血清緩沖液洗滌細(xì)胞一次以去除任何剩余的培養(yǎng)基；

注意：細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清可能含有脂酶活性，這會(huì)增加背景干擾。

（3）將鈣黃綠素藍(lán)，AM工作溶液添加到培養(yǎng)物中；

（4）在37℃下孵育細(xì)胞30-60分鐘；

（5）用HHBS或您選擇的緩沖液（包含陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，如1mM丙磺舒）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針；

（6）使用配置DAPI過(guò)濾器組的熒光顯微鏡、配置UV/紫激光和450/40nm過(guò)濾器（Pacific Blue Channel）的流式細(xì)胞儀或Ex/Em=360的熒光板讀取器測(cè)量熒光強(qiáng)度/450納米截止420納米。

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? ? 以上是百螢整理的鈣黃綠素藍(lán),AM在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中適用的儀器，工作溶液的配置以及樣本實(shí)驗(yàn)方案，希望對(duì)正在做實(shí)驗(yàn)或者準(zhǔn)備做實(shí)驗(yàn)的朋友有所幫助。