放射免疫分析 (RIA)

放射免疫測(cè)定 (RIA) 是一種使用放射性標(biāo)記分子逐步形成免疫復(fù)合物的免疫測(cè)定。 RIA 是一種非常靈敏的體外測(cè)定技術(shù)，用于測(cè)量物質(zhì)濃度，通常測(cè)量抗原濃度。

放射免疫測(cè)定或 RIA 是基于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的原理。 在該技術(shù)中，未標(biāo)記的抗原與放射性標(biāo)記抗原（具有 125I-γ 發(fā)射的放射性標(biāo)記，結(jié)合蛋白質(zhì)的酪氨酸或 3H-β 粒子發(fā)射）與高親和力抗體之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。 首先，抗原混合物用該濃度的已知量的抗體標(biāo)記，它能夠使抗體上的抗原結(jié)合位點(diǎn)飽和，通過(guò)它我們可以通過(guò) beta 或 gamma 計(jì)數(shù)器計(jì)算每分鐘的總計(jì)數(shù) (CPU)，之后的數(shù)量 獲得了使已知量的抗體飽和所需的放射性標(biāo)記抗原。

圖1：放射免疫分析 (RIA)。

將已知量的抗體（與之前使用的相同）添加到試管中，然后將已知量的放射性標(biāo)記抗原與未知濃度的未標(biāo)記測(cè)試樣品一起加入越來(lái)越多的抗原，并允許 標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原之間對(duì)抗體上可用抗原結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)，由于抗體不能區(qū)分標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原，隨著未標(biāo)記抗原濃度的逐漸增加，這會(huì)導(dǎo)致標(biāo)記抗原的置換，從而降低 在測(cè)試樣品存在期間抗體結(jié)合放射性標(biāo)記抗原的量（這稱(chēng)為每分鐘計(jì)數(shù)減少-CPM）。 它用于測(cè)量測(cè)試樣品中存在的抗原量。

在放射性降低和未標(biāo)記抗原的已知濃度之間生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 隨著它們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中濃度的增加，這被稱(chēng)為標(biāo)準(zhǔn)，我們通過(guò)在該圖上添加含有抗原的未標(biāo)記樣品并繪制該值，在我們的實(shí)驗(yàn)中減少放射性值或每分鐘計(jì)數(shù) (CPU) 值 在標(biāo)準(zhǔn)圖上，我們得到未標(biāo)記樣本中的抗原濃度。 我們可以采用以前存在的標(biāo)準(zhǔn)圖，但通常，標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)驗(yàn)同時(shí)運(yùn)行，并且它們生成的圖用于確定未知樣本中的反值。

RIA 用于檢測(cè)激素、藥物血清蛋白和維生素的水平，可以檢測(cè)到 1 毫升或更少的 0.001 微克。