隨著單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn)，我們所能探知的微觀世界越來(lái)越精準(zhǔn)，從肉眼可見(jiàn)的組織到不可見(jiàn)的細(xì)胞，傳統(tǒng)的技術(shù)一次性處理一塊組織，得到的是這塊組織中成千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的平均水平，而單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)研究的卻是單個(gè)細(xì)胞，能揭示單個(gè)細(xì)胞被掩蓋的特性，甚至細(xì)胞內(nèi)的分子機(jī)制，有效避免了傳統(tǒng)測(cè)序中存在的弊端，揭示了細(xì)胞與細(xì)胞之間的異質(zhì)性。隨著生物技術(shù)的創(chuàng)新，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)從一開(kāi)始的高成本低通量，到現(xiàn)在的低成本高通量，單次可捕獲高達(dá)10000個(gè)細(xì)胞，可用于細(xì)胞類型分析聚類，免疫學(xué)研究，干細(xì)胞研究，細(xì)胞間異質(zhì)性分析，發(fā)育生物學(xué)研究等，極大的推進(jìn)了基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)等的發(fā)展。

單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)在2018年飛速發(fā)展，各類技術(shù)和應(yīng)用紛紛上線，中科普瑞于2019年1月8日，整合IsoTex-BD China單細(xì)胞研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室近一年的研發(fā)測(cè)試和應(yīng)用，正式投入科研服務(wù)應(yīng)用，成立了BD（中國(guó)）- 中科普瑞單細(xì)胞研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室。

技術(shù)方案

為了更好地聚焦單細(xì)胞腫瘤臨床研究應(yīng)用，中科普瑞推出了單細(xì)胞研究系統(tǒng)解決方案，立足于BD Rhapsody 單細(xì)胞研究平臺(tái)開(kāi)展單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組和靶向轉(zhuǎn)錄組測(cè)序服務(wù)，并以單細(xì)胞腫瘤臨床研究為中心，著力進(jìn)行單細(xì)胞甲基化檢測(cè)等技術(shù)研發(fā)和應(yīng)用，進(jìn)而建立涵蓋單細(xì)胞甲基化研究、單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組研究以及單細(xì)胞蛋白組研究的立體式系統(tǒng)解決方案。通過(guò)BD Rhapsody平臺(tái)，在單細(xì)胞水平構(gòu)建從多樣本mRNA全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序到多樣本靶向測(cè)序技術(shù)的完整研究體系，同時(shí)利用最新的BD? AbSeq assay檢測(cè)單細(xì)胞水平的蛋白表達(dá)，實(shí)現(xiàn)特異高效檢測(cè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和蛋白組的多組學(xué)研究方案技術(shù)。為了進(jìn)一步降低單細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)成本，提高效率，中科普瑞研發(fā)了單細(xì)胞測(cè)序多樣本標(biāo)記解決方案（海膽捕獲技術(shù)），為單細(xì)胞研究提供新的思路。

樣本準(zhǔn)備

獲得新鮮的高質(zhì)量的生物樣本并妥善保存是做好單細(xì)胞測(cè)序的第一步，對(duì)最終獲得高質(zhì)量的單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果至關(guān)重要，為了提升單細(xì)胞研究的效率和質(zhì)量，中科普瑞自主開(kāi)發(fā)和代理了Sinotech?組織樣本凍存試劑盒，為您的轉(zhuǎn)錄組研究保駕護(hù)航！

Sinotech?組織樣本凍存試劑盒主要應(yīng)用于對(duì)新鮮組織樣本（人源臨床腫瘤樣本或移植物，小鼠組織器官樣本等）進(jìn)行迅速妥善地凍存，盡可能維持組織樣本原有的組織結(jié)構(gòu)和生物活性。為整合不同批次獲得樣本的集中實(shí)驗(yàn)以及樣本遠(yuǎn)距離運(yùn)輸提供時(shí)間、空間上的便利，Sinotech?組織樣本凍存試劑盒采用了優(yōu)化配比的凍存保護(hù)液配方，含有以DMSO等多種對(duì)生物組織樣本有特殊保護(hù)功能的凍存保護(hù)劑成分，既可快速均勻地滲透進(jìn)入組織樣本，保持組織樣本中細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及核酸、蛋白質(zhì)等亞細(xì)胞組分的穩(wěn)定不變，也盡可能地減少組織樣本在降溫過(guò)程中受到不規(guī)則冰晶帶來(lái)的損傷。為后續(xù)的下游實(shí)驗(yàn)（組織酶解消化為單細(xì)胞懸液、組織提取總RNA、組織提取總蛋白等）的順利進(jìn)行提供實(shí)驗(yàn)保障。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)妥善地凍存復(fù)蘇后的組織樣本，進(jìn)行酶解消化獲得的單細(xì)胞懸液，其細(xì)胞活力與細(xì)胞數(shù)目等參數(shù)均與用新鮮組織樣本獲得的單細(xì)胞懸液相近。該試劑盒可廣泛適用于人或小鼠的多種組織器官樣本的凍存保護(hù)，例如肝癌組織、肺癌組織、乳腺癌組織、卵巢癌組織以及腦膠質(zhì)瘤組織等。

樣本制備及質(zhì)檢

得到了高質(zhì)量的生物樣本，還需要制備高活性的單細(xì)胞懸液，才能得到高質(zhì)量的結(jié)果。為了保證客戶單細(xì)胞測(cè)序的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，避免人為操作影響生物樣本的正常生理狀態(tài)，在單細(xì)胞懸液制備過(guò)程在中，要盡量避免細(xì)胞破損以及下游分子實(shí)驗(yàn)抑制劑的污染，減少細(xì)胞的黏連和聚集，中科普瑞自主開(kāi)發(fā)了Solo?組織酶解試劑盒，提供全面的、詳細(xì)的單細(xì)胞懸液制備指導(dǎo)。

Solo?組織酶解試劑盒主要應(yīng)用于少量的新鮮或妥善凍存的組織樣本（人源臨床腫瘤樣本或移植物，小鼠組織器官樣本等），可溫和高效地獲得高質(zhì)量的（高細(xì)胞活力、足量細(xì)胞數(shù)目、較少細(xì)胞黏連和聚集）單細(xì)胞懸液。該試劑盒采用了優(yōu)化配比的復(fù)合消化酶配方，含有多種膠原酶及蛋白酶活性成分，既可快速有效地消化細(xì)胞外基質(zhì)從而釋放單個(gè)細(xì)胞，也盡可能保證了消化過(guò)后細(xì)胞膜表面蛋白的完整。為后續(xù)的下游實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞mRNA轉(zhuǎn)錄組測(cè)序；基于抗體標(biāo)記的多樣本標(biāo)記；基于抗體標(biāo)記的流式分析或分選；基于抗體標(biāo)記的磁珠分選）的順利進(jìn)行提供實(shí)驗(yàn)保障。

由于腫瘤組織以及正常組織樣本的細(xì)胞異質(zhì)性，應(yīng)用Solo?組織酶解試劑盒進(jìn)行組織樣本的酶解消化，通?？色@得包括腫瘤細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞以及浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞等在內(nèi)的多種細(xì)胞類型。該試劑盒適用于人或小鼠的多種組織器官樣本的消化酶解，例如肝癌組織、肺癌組織、乳腺癌組織、卵巢癌組織以及腦膠質(zhì)瘤組織等。

單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)

隨著技術(shù)進(jìn)步，科學(xué)家們?cè)絹?lái)越傾向于研究單個(gè)細(xì)胞內(nèi)RNA的變化，從而揭示了細(xì)胞行為的全新水平。但是目前單細(xì)胞RNA測(cè)序存在若干難點(diǎn)和痛點(diǎn)。單次實(shí)驗(yàn)成本高，高昂的單細(xì)胞捕獲建庫(kù)費(fèi)用，加上海量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序費(fèi)用，使得很多科研人員對(duì)單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)望而卻步。單次實(shí)驗(yàn)通量低，單細(xì)胞上機(jī)實(shí)驗(yàn)只能以低通量模式，分批次分離捕獲多個(gè)臨床樣本，極大阻礙了科研項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)積累進(jìn)度。批次差異影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，不同樣品分批次上機(jī)捕獲、建庫(kù)和測(cè)序帶來(lái)顯著的批次效應(yīng)，極大的影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和可信度。單細(xì)胞捕獲實(shí)時(shí)監(jiān)控難，常規(guī)需要完成捕獲建庫(kù)測(cè)序的全部流程，最終通過(guò)生信分析才能得知真實(shí)捕獲的細(xì)胞數(shù)目是否符合預(yù)期。

為了解決這些難點(diǎn)和痛點(diǎn)，結(jié)合BD適用于單細(xì)胞靶向轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的多樣本標(biāo)記試劑盒，中科普瑞開(kāi)展一系列預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)各項(xiàng)研究和驗(yàn)證，獨(dú)立開(kāi)發(fā)出了適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的多樣本標(biāo)記技術(shù) — 海膽捕獲技術(shù)，該技術(shù)包含了兼容多樣本標(biāo)記和單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的完整建庫(kù)流程，以及適配優(yōu)化的樣本標(biāo)簽識(shí)別流程算法，在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)現(xiàn)高效的單細(xì)胞樣品標(biāo)記和生信算法識(shí)別。該技術(shù)存在的優(yōu)勢(shì)可以有效解決單細(xì)胞測(cè)序研究中的種種難點(diǎn)，從而在保證單個(gè)基因測(cè)序數(shù)據(jù)的前提下，極大降低了單個(gè)樣本的測(cè)序成本。

中科普瑞海膽捕獲技術(shù)能實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)控、平行檢測(cè)，BD Rhapsody 平臺(tái)可通過(guò)實(shí)時(shí)樣品，監(jiān)測(cè)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量；通過(guò)海膽捕獲技術(shù)可以平行化檢測(cè)來(lái)自于不同樣本的數(shù)萬(wàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)情況，精確度和維度都具有極大優(yōu)勢(shì)，使得更大規(guī)模臨床數(shù)據(jù)采集更為可行。可降低成本，提高效率，海膽捕獲技術(shù)可以在一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)完成多個(gè)樣品的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，使單細(xì)胞測(cè)序成本進(jìn)一步下降，使科學(xué)家可以用一定的科研經(jīng)費(fèi)完成更多的樣本數(shù)目；同時(shí)提高了單次實(shí)驗(yàn)的樣本通量，有助于加快科研項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)積累進(jìn)度，提高科研效率。精準(zhǔn)可靠、規(guī)避批次差異，海膽捕獲技術(shù)可以保證多個(gè)樣本來(lái)源的細(xì)胞，同步經(jīng)歷單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組捕獲，反轉(zhuǎn)建庫(kù)，測(cè)序分析的完整流程。有效避免了由于不同批次上機(jī)和測(cè)序帶來(lái)的批次效應(yīng)的對(duì)于最終實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果的干擾，進(jìn)一步保證了單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)嶒?yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

生物信息解決方案

中科普瑞擁有經(jīng)驗(yàn)豐富的單細(xì)胞生信分析團(tuán)隊(duì)和專用高性能服務(wù)器，在保證專業(yè)高效的基礎(chǔ)流程分析上，提供多角度、多維度的個(gè)性化補(bǔ)增分析，全面滿足不同層次分析需求。