Worthington丨艾美捷Worthington醛縮酶研究方案
醛縮酶催化糖酵解和能量產(chǎn)生中的關(guān)鍵反應(yīng)。
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醛縮酶存在于所有動(dòng)植物組織以及大多數(shù)微生物中。在動(dòng)物和高等植物組織中發(fā)現(xiàn)的?I?類醛縮酶的特點(diǎn)是不需要二價(jià)金屬輔因子,并且與底物磷酸二羥丙酮形成酮亞胺席夫堿中間體。僅在原核生物和低等真核生物中發(fā)現(xiàn)的?II?類醛縮酶需要二價(jià)金屬輔因子(Heron?和?Caprioli 1975,London 1974,和?Lebherz等人1973,Gefflaut等人1995)。I?類醛縮酶分為三種類型:?A?型(主要形式)存在于肌肉中;肝腎B型;和大腦中的?C?型(加上一些?A)(Horecker等人1972)。
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艾美捷Worthington醛縮酶穩(wěn)定性/儲(chǔ)存:酶在低于?4.5?的?pH?值下發(fā)生不可逆的變性。硫酸銨溶液中的結(jié)晶懸浮液,pH 7.6,在?2-8°C?下可穩(wěn)定至少六個(gè)月。
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單位定義:
在?25°C、pH 7.5?條件下,一個(gè)單位會(huì)導(dǎo)致每分鐘增加?1.0 A240,采用肼/3-磷酸甘油醛測(cè)定法(Jagannathan等人,Biochem. J., 63 94, 1956)。
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艾美捷Worthington醛縮酶應(yīng)用:
化學(xué)酶合成(Bolt et al . 2008?和?Calveras et al. 2009)
結(jié)構(gòu)-功能研究?(St.-Jean et al. 2005)
有機(jī)合成(Castillo等人,?2006?年,Concia等人,?2009?年)
D-果糖-1,6-二磷酸的定量
耦合反應(yīng)中的代謝物測(cè)定?(Hiller et al. 2007)
柱和凝膠中的分子量標(biāo)記
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艾美捷Worthington醛縮酶的特征:
分子量:
156.8 kDa(理論值)
x佳?pH:
6.9-8.8
等電點(diǎn):
8.47(理論)
消光系數(shù):
133,560 cm -1 M -1(理論值)
E 1%,280 = 8.52(理論)
活性位點(diǎn)殘留:
賴氨酸?(K229)
谷氨酸?(E187)
加上其他帶電殘基(由于在活性位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)的許多帶電氨基酸非常接近,功能分配很復(fù)雜)(St.-Jean et al . 2005)
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艾美捷Worthington醛縮酶測(cè)定方法:
基于?Boyer?對(duì)肼測(cè)定法的改進(jìn)?(Jagannathan等人1956),其中?3-磷酸甘油醛與肼反應(yīng)形成在?240 nm?處吸收的腙。該系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是其簡(jiǎn)單性和特異性。一個(gè)單位被描述為在指定條件下?25°C?和?pH 7.5?時(shí)每分鐘?1.00?的吸光度變化。Rutter (1961)?已經(jīng)描述了測(cè)定醛縮酶的替代方法。已使用偶聯(lián)的α-甘油磷酸脫氫酶測(cè)定法(Richards et al . 1961)。
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艾美捷Worthington醛縮酶部分參考文獻(xiàn):
Allen, B. , Gracy, R. and Harris, B.
Studies on Aldolase from Human Cardiac Tissue , Arch Biochem Biophys 155 , 325 , 1973
Anderson, L. , Heinrikson, R. and Nyes, C.
Chloroplast and Cytoplasmic Enzymes. Subunit Structure of Pea Leaf Aldolases , Arch Biochem Biophys 169 , 262 , 1975
Anderson, P. and Kaplan, H.
Reactivity of the Active-Centre Lysine Residue of Rabbit Muscle Aldolase , Biochem J 137 , 181 , 1974
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Worthington核心酶用于生命科學(xué)研究、原代細(xì)胞和干細(xì)胞分離、生物加工、生物制藥、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。