來源??TMR Publishing Group作者??Traditional Medicine Research 編輯部???

哮喘是一種慢性炎癥，導(dǎo)致氣道阻塞和氣道平滑肌(ASM)對直接或間接刺激產(chǎn)生高反應(yīng)性，導(dǎo)致支氣管收縮。氣道平滑肌細胞是調(diào)節(jié)氣道阻力和高反應(yīng)性的主要細胞，是哮喘和疾病加重的顯著特征。除了過敏性哮喘產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)會調(diào)節(jié)ASM的收縮性外，藥用植物對氣管平滑肌的松弛作用還有多種調(diào)節(jié)機制，如鉀通道開放、鈣通道阻斷、?2-腎上腺素能受體刺激、一氧化氮(NO)產(chǎn)生、環(huán)氧合酶(COX)途徑和磷酸二酯酶(PDE)活性等。

華山參(HSS)最早記載于《本草綱目增編》，已廣泛用于哮喘的治療。HSS滴丸充分利用其消炎、祛痰、止咳作用，由華山參為原料，由黃芪提取物組成。HSS滴丸是中國藥典(批準號：Z10900001)正式上市的專利藥物。HSS滴丸含有11種生物堿，如阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿。據(jù)報道，山莨菪堿可減少嗜酸性氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。

然而，HSS滴丸的抗哮喘機制研究較少。與此同時，目前尚不清楚是哪種化合物有抗哮喘的作用。本研究旨在探討口服HSS滴丸后大鼠血漿中的主要成分，并探討其治療的可能機制。然后，通過離體氣管模型研究了HSS滴丸的抗哮喘機制。

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研究方法

本文采用高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜法（HPLC-QTOF-MS）鑒定了口服HSS后大鼠血漿中的成分。利用卵清蛋白(OVA)致敏的過敏性哮喘模型，探究HSS抗過敏性哮喘的可能機制。此外，利用Wistar大鼠的離體氣管探究HSS對ASM松弛的影響。

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研究結(jié)果

大鼠血漿中HSS吸收情況的鑒定

采用HPLC-QTOF/MS法分析大鼠血漿中的成分。在含有HSS的血漿中，可明顯檢測到阿托品、 山莨菪堿和東莨菪堿作為毒蕈堿拮抗劑（圖2）。根據(jù)之前報告中HSS的成分分析，通過將其保留時間和質(zhì)譜與標準品的特性進行比較，確定了D-山莨菪堿、L-山莨菪堿、東莨菪堿和阿托品(表1)。D-山莨菪堿在m/z306.1697處產(chǎn)生了一個前驅(qū)體離子[M+H]+。L-山莨菪堿的特征離子與D-山莨菪堿相同，而不同的保留時間值是其差異的一個指標。東莨菪堿在m/z304.1537處產(chǎn)生了一個前體離子[M+H]+。在m/z156.1014[m+H]+處的片段離子是由親本離子中丟失一個中性片段(C9H8o2)產(chǎn)生的。阿托品在m/z290.1749處產(chǎn)生了一個前體離子[M+H]+。在m/z124.1119[m+H]+處的片段離子是由母離子失去莨菪酸(C9H10O3)而產(chǎn)生的。結(jié)果表明，山莨菪堿、東莨菪堿和阿托品是HSS的活性成分。

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HSS減輕了過敏性哮喘的氣道炎癥反應(yīng)觀察小鼠的行為（圖2A1-4和B1-3）所示，與對照組小鼠相比，OVA誘導(dǎo)小鼠的平均速度、線性和活動顯著降低。然而，與模型組相比，HSS組和地塞米松（DM）組小鼠活動、線性和平均速度顯著增加。為觀察HSS是否能抑制過敏性哮喘的炎癥反應(yīng)，我們觀察了肺組織。與對照組相比，模型組肺組織中存在炎癥細胞浸潤、氣管收縮、氣道上皮增生、基底膜增厚(圖2C1和C2)。與模型小鼠相比，HSS組和DM組的肺組織學(xué)變化明顯受到抑制(圖2C2-4)。與對照組相比，模型小鼠BALF中IgE、IL-4、IL-5、ET-1和蛋白水平大幅增加，而BALF中的INF-γ水平下降(圖2D1-D6)。HSS組和DM組與模型小鼠相比，顯著降低了BALF中IgE、IL-4、IL-5和ET-1的含量，并提高了INF-γ水平。?
HSS抑制了Ach誘導(dǎo)的ASM的收縮采用氣管環(huán)法測量HSS的劑量效應(yīng)，進一步評價氣管平滑肌的舒張程度。結(jié)果顯示，Ach收縮的氣管環(huán)具有顯著的濃度依賴性松弛效應(yīng)(圖3A和B)。為評估HSS放松氣管活動的因素，分別檢測對照組和模型組中的普萘洛爾、茶堿、消炎痛和L-NAME。普萘洛爾，茶堿，消炎痛和L-NAME均無顯著差異，表明HSS的氣管松弛作用不受β-腎上腺素能受體、PDE、COX和NOS的影響(圖3C-F)。?

HSS影響鉀通道，鈣的流入和釋放采用Ca2+激活的通道抑制劑TEA，KV通道抑制劑4-AP和KATP通道抑制劑格列本脲作為不同藥物作用的K+通道阻滯劑，評價HSS對氣管平滑肌的弛緩作用。如圖4A-D所示，TEA對HSS誘導(dǎo)的反應(yīng)有影響(38.56±4.33%，p<0.001)。然而，4-AP和格列本脲對HSS誘導(dǎo)的反應(yīng)沒有影響。結(jié)果表明，HSS影響了KCa通道放松ASM。為了確定HSS的支氣管擴張是否由Ca2+內(nèi)流介導(dǎo)，我們觀察了HSS對氯化鈣曲線的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HSS使氯化鈣最大收縮值降低36.98±14.96%。硝苯地平預(yù)處理也將最大收縮量降低至44.90±3.40%(圖4E)。上述兩次收縮均低于對照組，說明HSS抑制采用Ca2+流入從而松弛ASM。HSS預(yù)處理15min使Ach誘導(dǎo)的收縮顯著降低至76.63±7.12（圖4F），高于對照組。這表明HSS抑制了Ca2+的釋放從而松弛了ASM。?

鉀通道抑制劑、鈣的流入和釋放對阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿誘導(dǎo)弛緩的影響隨后，測定血漿中的生物堿（包括阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿），以確保K通道中哮喘的活性成分和鈣的內(nèi)流或釋放。結(jié)果顯示，TEA對山莨菪堿和東莨菪堿誘導(dǎo)的反應(yīng)有影響，但對阿托品的誘導(dǎo)沒有影響（圖5A-C）。此外，阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿均影響鈣的流入和釋放（圖5D-E）。?
結(jié)論本研究采用HPLC-QTOF-MS方法對大鼠血漿中D-山莨菪堿、L-山莨菪堿、東莨菪堿和阿托品進行分離鑒定。通過哮喘動物模型和離體氣管實驗，發(fā)現(xiàn)HSS抑制炎癥介質(zhì)的釋放，調(diào)節(jié)的平衡Th1/Th2減少氣道炎癥，和放松氣管平滑肌通過控制KCa通道，Ca2+流入和釋放減少氣道高反應(yīng)性。阿托品、山莨菪堿和東莨菪堿可能是HSS的活性成分。因此，本研究有助于了解HSS治療哮喘的作用機制，為今后的研究奠定基礎(chǔ)。

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引用格式
Liu Y, Cui NN, Liu XS, et al. Anti-asthmatic mechanism of the Huashanshen dripping pill via suppressing contraction of the airway smooth muscle.?Tradit Med Res. 2022;7(3):20. doi:10.53388/TMR20211124252

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