關(guān)于牛血清白蛋白修飾超氧化物歧化酶的化學(xué)修飾過程

今天小編整理并分享關(guān)于牛血清白蛋白修飾超氧化物歧化酶的化學(xué)修飾過程：

修飾過程：

方法 :用戊二醛作為交聯(lián)劑 ,用牛血清白蛋白 (BSA)將牛紅細(xì)胞超氧化物歧化酶進(jìn)行化學(xué)修飾 ,得到SOD的修飾酶.對比研究三種SOD:修飾酶 ,混合酶及天然酶的理化性質(zhì)。

修飾酶的制備：

將1mg soD 凍于粉(比活3300u/mg)溶于500pl 5mmolL,pH 7.0磷酸緩沖液中。準(zhǔn)確稱取2.5mg 牛血清白蛋白(BSA),溶于200pl 5mmol L, pH 7.0_磷酸緩沖液中。取250pul SOD(660Ou ml)與上述BSA溶液混合均勻。

置于冰水浴中,緩慢加入10pl 25%的皮二醛水溶液,反應(yīng)3h后,加入20mg 甘氨酸終止反應(yīng),然后加 3mg固體硼氫化鈉,直至溶液由黃綠色變成無色。用SmmolL, pH 7.0的磷酸緩沖液在4℃透析24h,每8h換1次緩沖溶液,得到牛血清白蛋白修飾的SOD(修飾酶)。

另取125ml SoD( 6600u/ml)加BSA 得到酶液(混合酶),其余125pulsOD放在Ep管作為對照(天然酶),4℃冰箱保存。

結(jié)果 :修飾酶等電點(diǎn)降低 ,對溫度,pH的穩(wěn)定性較天然酶有很大提高 ,對胰蛋白酶和胃蛋白酶也表現(xiàn)出很強(qiáng)的耐水解性.二價(jià)離子Mg2 + ,Mn2 + 對三種SOD活力均有不同程度的抑制作用 ,Ca2 + ,Zn2 + ,Cu2 + 對修飾酶活力有激活作用 ,一價(jià)離子K+ 對三種OSD活力均無明顯影響.

結(jié)論 :修飾酶較天然酶的穩(wěn)定性有很大的提高 ,加入Ca2 + ,Zn2 + ,Cu2 +可提高修飾酶的活力。

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一類廣存在于生物體內(nèi)的金屬酶，能催化超氧陰離子(02-)歧化反應(yīng)，是體內(nèi)氧自由基的天然清除劑，與過氧化氫酶(catalase，CAT)協(xié)作，具有防御氧毒性，增強(qiáng)機(jī)體抗輻射損傷的能力，可用于治療氧自由基誘發(fā)的腫瘤，炎癥，缺血-再灌注損傷，和諸如帕金斯綜合癥，老年癡呆癥，肌萎縮性(脊髓)側(cè)索硬化等神經(jīng)性病變。

但是SOD在體內(nèi)半衰期短，穩(wěn)定性差，具有異源蛋白免疫源性，及細(xì)胞膜的通透性差等缺點(diǎn)，限制了其臨床應(yīng)用。為克服SOD的這些缺點(diǎn)，國內(nèi)外已有很多研究，試圖用脂質(zhì)體包埋，人工合成類SOD活性物質(zhì)和化學(xué)修飾的辦法進(jìn)行解決，SOD的化學(xué)修飾技術(shù)被廣為研究和應(yīng)用。

Daphnetin-BSA

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