為了督促自己積極讀文獻qwq，所以把筆記發(fā)在這里。今天是Day1，flag是兩天一篇，猜猜什么時候會倒（劃掉）

這幾天打算讀讀心血管相關(guān)，主要是付毅老師和孔煒老師組的文章（小聲）

今天看的是付毅組6月20號在cell reports medicine上的文章，標題為Targeting cytokine-like protein FAM3D lowers blood pressure in hypertension，靶向細胞因子樣蛋白FAM3D緩解高血壓。

放個鏈接：https://doi.org/10.1016/j.xcrm.2023.101072

FAM3D是一種具有趨化活性的細胞因子樣蛋白，通過其細胞表面受體FPR1和FPR2募集單核細胞和中性粒細胞。付毅老師組之前的研究發(fā)現(xiàn)FAM3D在腹主動脈瘤(AAA)發(fā)病過程中在內(nèi)皮細胞(ECs)中顯著上調(diào)，通過FPR1和FPR2信號，誘導中性粒細胞募集，加重AAA的發(fā)生。這篇研究評估的是FAM3D是否參與高血壓的發(fā)病機制。但是為什么會從腹主動脈瘤想到做高血壓？橘貓不明白qwq

Result1: The increase in FAM3D correlates with the pathogenesis of hypertension

先來看第一個結(jié)果。作者參考了80例高血壓患者與80例健康對照組，測定血漿中FAM3D的水平，之后又使用不同處理得到的高血壓小鼠模型測FAM3D，具體的統(tǒng)計方法不在這里贅述，得到的結(jié)論是FAM3D在內(nèi)皮細胞中表達的上調(diào)與高血壓發(fā)病相關(guān)。

Result2: FAM3D deficiency ameliorates AngII-induced hypertension and related vascular pathologies

第二部分是個老套路，要驗證FAM3D與高血壓發(fā)病的相關(guān)性，于是敲掉了FAM38。

對于野生型、FAM3D缺陷型小鼠，使用無創(chuàng)尾袖法和有創(chuàng)無線電遙感法，比較AngII注射后的舒張壓、收縮壓、平均動脈壓

在輸注AngII后，WT小鼠的收縮壓、舒張壓和MAP逐漸升高，而FAM3D缺乏顯著降低了AngII誘導的血壓升高。

這是24小時血壓遙感監(jiān)測? ////方法的名字都好高端哇

另外還有一些高血壓相關(guān)的病變，例如AngII輸注顯著增加動脈脈搏波速度(PWV)和胸主動脈外膠原沉積，而FAM3D敲除抑制了這些改變。此外，流式細胞分析顯示，F(xiàn)AM3D缺失減輕了主動脈壁的白細胞浸潤，表明FAM3D誘導血管白細胞募集。以上表明，F(xiàn)AM3D基因敲除可減輕血管炎引起的高血壓和相關(guān)的血管僵硬和炎癥。

Result3: FAM3D impairs endothelium-dependent vasorelaxation to further enhance vasoconstriction

這個部分在研究FAM3D對血管舒張性和收縮性的影響。這里使用了苯腎上腺素作為血管收縮的誘導劑，AngII注射14天之后，敲除組動脈對苯腎上腺素的收縮反應(yīng)明顯減弱。用NO合成酶抑制劑L-NG硝基精氨酸甲酯(L-NAME)預處理動脈，引起內(nèi)皮功能障礙，結(jié)果二者的差異被消除了，表明FAM3D通過影響內(nèi)皮功能調(diào)節(jié)血管收縮。

這部分之后還用到了乙酰膽堿和硝普鈉.....總之，得到的結(jié)論是FAM3D特異性地減弱了內(nèi)皮依賴性動脈舒張，并進一步加強了血管收縮

Result4: FAM3D causes eNOS uncoupling in ECs in vitro

第四部分就深入到機制方面了。在上一部分里提到了血管舒張，而引起血管舒張的最重要因素就是NO，因此在這里才會把目光靶向eNOS。偶聯(lián)的eNOS依賴性NO的產(chǎn)生對于內(nèi)皮依賴性血管舒張至關(guān)重要，而eNOS解耦降低NO的生物利用度并損害血管舒張。

FAM3D劑量依賴性地降低了ec中NO的產(chǎn)生和分泌? ////我查了查這個DAF-FM DA染色，是一種檢測NO的熒光探針方法

而eNOS解偶聯(lián)抑制劑BH4顯著逆轉(zhuǎn)了FAM3D對ec中NO產(chǎn)生的抑制? ?///圖太大了排版很難看，但橘貓不會改qwq

而通過WB驗證了總eNOS含量并沒有改變，僅僅是解偶聯(lián)形式的eNOS變多了

于是這一部分的結(jié)論是FAM3D在體外可誘導eNOS解偶聯(lián)，成為單體形式，不能夠產(chǎn)生NO，導致血管內(nèi)皮舒張功能障礙。

Result5: FAM3D deficiency reverses eNOS uncoupling to alleviate hypertension in vivo

又到老套路了！開始敲除。

這是NO升高

這是超氧陰離子增多

這是單體eNOS變少

用DAHP消除FAM3D缺陷介導的AngII輸注后一氧化氮生物利用度的恢復，F(xiàn)AM3D缺陷的保護作用消失。

這些結(jié)果表明FAM3D缺乏通過恢復eNOS偶聯(lián)來緩解高血壓。

Result6: FAM3D leads to eNOS uncoupling through FPR1/2-mediated oxidative stress

很自然地想到，F(xiàn)AM3D為什么會導致eNOS解偶聯(lián)？

基于之前的研究，F(xiàn)PR1和FPR2介導FAM3D誘導的中性粒細胞聚集，于是使用環(huán)孢素H (CsH)和WRW4分別拮抗FPR1和FPR2。兩種拮抗劑均顯著抑制FAM3D介導的eNOS單體化以及內(nèi)皮細胞NO生物利用度下降，表明FPR1和FPR2參與了FAM3D誘導的eNOS解偶聯(lián)和內(nèi)皮功能障礙。

FAM3D在刺激后15分鐘至1小時內(nèi)增加了細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，而CsH和WRW4在FAM3D處理后有效抑制了ECs中ROS的積累。而ROS正是eNOS解偶聯(lián)的關(guān)鍵。

ROS抑制劑NAC和NADPH氧化酶抑制劑apocynin可以減輕氧化應(yīng)激，并顯著逆轉(zhuǎn)FAM3D誘導的NO水平和eNOS單體化。

這一部分理一理qwq，大概是FAM3D會通過FPR1/2引發(fā)氧化應(yīng)激，產(chǎn)生的ROS引發(fā)eNOS解偶聯(lián)，進而導致NO生成障礙，內(nèi)皮舒張障礙。

Result 7: Targeting FAM3D ameliorates hypertension

最后一部分，對靶向FAM3D的療效進行檢驗。來看看怎么造模的——shRNA敲FAM3D，注射14天AngII

內(nèi)皮細胞FAM3D敲低逆轉(zhuǎn)eNOS解偶聯(lián)，eNOS單體化降低，NO生物利用度增加，從而降低小鼠的血壓

還用了DOCA鹽誘導模型，效果類似。

為了進一步在體內(nèi)靶向FAM3D，使用了一種FAM3D中和抗體6D7，以阻斷FAM3D的功能。大概是一邊注射AngII，一邊注射6D7。

結(jié)果同樣是逆轉(zhuǎn)eNOS解偶聯(lián)，eNOS單體化降低，NO生物利用度增加，從而降低小鼠的血壓。又用了鹽造模，結(jié)果類似。

這表明FAM3D中和抗體有希望作為高血壓干預治療策略。

Conclusion

這是文章給出的總結(jié)：“細胞因子樣蛋白FAM3D通過FPR1/2介導的氧化應(yīng)激直接導致eNOS解偶聯(lián)，從而加重內(nèi)皮功能障礙和高血壓。靶向內(nèi)皮來源的FAM3D或給藥FAM3D中和抗體恢復eNOS偶聯(lián)，降低血壓。因此，F(xiàn)AM3D可能是治療高血壓患者內(nèi)皮功能障礙的一個有希望的靶點?！?/p>

本來應(yīng)當讀讀discussion部分，但太晚了，橘貓需要睡覺了。

對FDM3D以及FDR1/2，非常需要再去詳細了解，打算下一篇就讀腹主動脈瘤那篇。在下一篇筆記里，會寫到FDM3D-FDR1/2的詳細介紹。

晚安喵