1．包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)

名稱

規(guī)格

特性

PER0020

AutoExp原核培養(yǎng)基

100ml

無需IPTG誘導(dǎo)，蛋白即可自動(dòng)大量表達(dá)

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2．保存條件：本品置于-20℃保存，有效期1年。冷凍保存后出現(xiàn)微量沉淀為正?，F(xiàn)象，不影響效果。

3．產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

FrdbioRAutoExp是Frdbio公司推出的新型蛋白誘導(dǎo)表達(dá)培養(yǎng)基組分。大腸桿菌表達(dá)菌株在含AutoExp的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)后期能夠開始自行大量表達(dá)目的蛋白。與傳統(tǒng)的IPTG誘導(dǎo)相比，使用AutoExp進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)具有以下優(yōu)勢(shì)：1）表達(dá)量高，是傳統(tǒng)IPTG法誘導(dǎo)量的數(shù)倍；2）操作簡(jiǎn)單，省卻了對(duì)菌體濃度、IPTG用量及誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化；3）重復(fù)性好，不同批次的蛋白誘導(dǎo)情況穩(wěn)定。

4．適用范圍

能用IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)的大腸桿菌菌株。

5．使用方法

l??將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主，挑取轉(zhuǎn)化子于含有相應(yīng)抗生素的2 ml 含0.8% LB液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)?；罨囵B(yǎng)基中添加葡萄糖可防止蛋白滲漏表達(dá)并造成細(xì)胞毒性。

l??在每個(gè)含50 ml LB培養(yǎng)基的三角瓶中（容積為250 ml）加入2 ml AutoExp，并添加合適濃度的抗生素。

l??向三角瓶中接種0.2 ml新鮮活化的菌液。

l??將三角瓶用干燥濾紙片封口，置于37 ℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速設(shè)為200 rpm。

l??培養(yǎng)菌體至飽和（約12-15小時(shí)）后收集細(xì)胞，隨即進(jìn)行細(xì)胞破碎和蛋白純化。

6．注意事項(xiàng)

l??不要在培養(yǎng)基中添加額外成分，也不要改變菌體生長(zhǎng)溫度、縮短菌體生長(zhǎng)時(shí)間，否則目的蛋白可能無法被正常誘導(dǎo)。

l??為達(dá)到最大的蛋白誘導(dǎo)量，培養(yǎng)過程中應(yīng)使培養(yǎng)液具有足夠的通氣量，因此三角瓶中培養(yǎng)基的量不可過多，瓶口應(yīng)用通氣性良好的濾紙封閉，且培養(yǎng)時(shí)搖床的轉(zhuǎn)速不可過低。

l??許多情況下50 ml經(jīng)AutoExp誘導(dǎo)的菌液可表達(dá)高至5~20 mg的目的蛋白。但對(duì)于少數(shù)毒性蛋白，AutoExp的誘導(dǎo)量會(huì)較低。

l??平均而言，AutoExp誘導(dǎo)與IPTG誘導(dǎo)得到的蛋白在可溶性方面相當(dāng)。

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7．附注

l??LB培養(yǎng)基配制方法：稱取10 g tryptone，5 g yeast extract，5 g NaCl，加水溶解，定容至1 L，然后按每瓶50 ml分裝至容積為250 ml的三角瓶中，置于121℃滅菌30 min。

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*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用