1、胎牛血清和小牛血清的區(qū)別及注意事項(xiàng)？

?來源不同：新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛，而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血**的胎牛的血清。

組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，

使用濃度不同：一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

注意事項(xiàng)：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。

2、怎樣儲存和解凍血清避免產(chǎn)品質(zhì)量受損?

首先需要將血清產(chǎn)品從冷凍箱中取出，先放置于2～8℃冰箱使之溶解，然后放在室溫中使之全融。在融解過程中需要不定時的輕微晃動，使血清成分均勻，減少融化過程中產(chǎn)生沉淀機(jī)會。

其次，血清長時間存放于2-8℃時，可能會聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見的混濁。因此，我們推薦長期儲存血清需在-20℃以下，并避免反復(fù)凍融。

最后，若短期使用存放于4℃時，請勿超過一個月。若在實(shí)驗(yàn)中血清未能一次用完一瓶血清，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)（由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形），再放回冷凍。

3、血清中包含絮狀沉淀是什么？怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過程產(chǎn)生沉淀是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。想要去除這些絮狀沉淀物，有兩種方法：1、可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。2、將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里，大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

4、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)在2～8℃解凍血清時，請將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。同樣原理，分裝凍存的時候，須輕微的均勻搖晃，避免產(chǎn)生氣泡，使溫度與成分均一！

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(5)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用完它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

6、為什么要熱滅活血清?

事實(shí)上，大部分細(xì)胞培養(yǎng)不需要滅火血清，僅在培養(yǎng)部分特殊細(xì)胞時進(jìn)行滅火。如在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等特殊細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥梢詼缁钛a(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

7、有必要做熱滅活嗎?

在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理，不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!因?yàn)榻?jīng)過熱處理的血清，沉淀物的行程會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)有很多的“小黑點(diǎn)”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

8、血清需要做支原體檢測嗎

支原體污染是世界性問題，有報(bào)道指出，支原體輕微污染即可影響200多個基因的表達(dá)，Nature雜志從2013年起，要求涉及細(xì)胞培養(yǎng)的研究，必須進(jìn)行支原體檢測。李記生物每批次血清均用支原體檢測試劑進(jìn)行檢測，可以檢出99.9%的已發(fā)現(xiàn)支原體種類，客戶不需要另外檢測，但我們?nèi)匀粡?qiáng)烈建議培養(yǎng)細(xì)胞中定期進(jìn)行支原體檢測，以排除實(shí)驗(yàn)操作中人為帶入支原體污染。