一、紫外-可見(jiàn)分光光度法

? ? ? ? 是基于物質(zhì)分子對(duì)紫外光區(qū)和可見(jiàn)光區(qū)的單色光輻射的吸收特性建立的光譜分析方法。

二、方法特點(diǎn)

1、簡(jiǎn)便易行：本法使用的儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及。

2、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)10-6g/ml，適用于低濃度試樣的分析。

3、準(zhǔn)確度高：本法的相對(duì)誤差不大于2%，適用于對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度有較高要求的試樣的分析。

4、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對(duì)結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。

三、基礎(chǔ)為朗伯-比爾定律，如下圖所示

四、含量測(cè)定的方法可分為四種

對(duì)照品比較法、吸收系數(shù)法、計(jì)算光度法、比色法，以前兩個(gè)為舉例；

1、對(duì)照品比較法：

? ? ? ?按各品種項(xiàng)下的方法，分別制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的100%±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后，按下圖公式計(jì)算。

其中Cx為供試品溶液的濃度、Ax為供試品溶液的吸光度、Cr為對(duì)照品溶液的濃度、Ar為對(duì)照品溶液的吸光度。

固體制劑的含量測(cè)定如下圖所示

2、吸收系數(shù)法：

? ? ? ?按各品種項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。供試品溶液濃度如下圖所示。

方法特點(diǎn)

1、高靈敏度：熒光分光光度法的靈敏度一般較紫外風(fēng)光光度法更高其靈敏度可達(dá)10-9g/ml。

2、熒光自熄火：當(dāng)溶溶液中熒光物質(zhì)的濃度太高時(shí)，溶液會(huì)發(fā)生自熄滅現(xiàn)象，同時(shí)由于在液面附近的溶液會(huì)吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強(qiáng)度降低，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度與濃度不成正比。

3、易受干擾：熒光分光光度法因靈敏度高，故干擾因素多，因此必須做空白實(shí)驗(yàn)。

方法：

? ? ? ?由于不宜測(cè)定絕對(duì)熒光強(qiáng)度，通常熒光分光光度法是在一定條件下，測(cè)定對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度與其濃度的線性關(guān)系。當(dāng)線性關(guān)系良好時(shí)，可在每次測(cè)定前，用一定濃度的對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度，然后在相同條件下，分別讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白的熒光強(qiáng)度與供試品溶液及其試劑空白的熒光強(qiáng)度，用下圖方法計(jì)算。

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