RNAi?是由雙鏈RNA分子介導(dǎo)，特異性降解同源性mRNA使其表達(dá)沉默的過程，是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默。RNAi技術(shù)日趨完善和成熟，目前已成為基因研究不可缺少的工具，并在功能基因組學(xué)、基因治療學(xué)等多領(lǐng)域發(fā)揮強(qiáng)大作用。

RNAi的實(shí)現(xiàn)首先需要制備性質(zhì)穩(wěn)定、作用持久的小分子RNA，siRNA和shRNA都是RNAi技術(shù)中常用的小分子RNA。

實(shí)現(xiàn)RNAi效應(yīng)，載體系統(tǒng)的選擇同樣重要。

目前載體系統(tǒng)主要分為非病毒載體和病毒載體系統(tǒng)兩大類：非病毒載體具有低免疫原性、安全性較高的優(yōu)點(diǎn)，但其轉(zhuǎn)染效率往往較低；病毒載體因具有較高的轉(zhuǎn)染效率而更多地被用于基因功能研究。常用的病毒載體主要包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體等。

不同病毒載體對(duì)比：

載體種類優(yōu)勢(shì)不足逆轉(zhuǎn)錄病毒易包裝獲得，免疫原性低，高效感染，目的基因穩(wěn)定地整合到靶細(xì)胞基因組而長(zhǎng)期表達(dá)，且不產(chǎn)生輔助病毒。滴度低，只能感染分裂期細(xì)胞。腺病毒轉(zhuǎn)基因效率高，宿主范圍較廣，能感染幾乎所有的細(xì)胞類型，能有效增殖，滴度高，遺傳毒性較低，安全性高。目的基因不能整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組。腺相關(guān)病毒既可以感染分裂細(xì)胞，也可以感染靜止細(xì)胞，免疫反應(yīng)輕微。攜帶外源基因的能力有限，整合時(shí)需要輔助病毒感染才能復(fù)制，滴度較低。

慢病毒載體

慢病毒載體是一種新型的基因轉(zhuǎn)移載體，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，為二倍體RNA病毒，幾乎能夠感染所有組織來源的細(xì)胞，可通過逆轉(zhuǎn)錄酶將病毒RNA逆轉(zhuǎn)為DNA，通過病毒整合酶整合入宿主細(xì)胞基因組，使被感染的細(xì)胞及其子代細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)病毒基因。常見的慢病毒有：HIV（人類免疫缺陷病毒）、FIV（貓免疫缺陷病毒）以及EIAV（馬傳染性貧血病毒）等。

慢病毒載體系統(tǒng)?是目前廣泛使用的基因操作工具，已從第一代發(fā)展到至今的第三代，其穩(wěn)定性及生物安全性不斷改進(jìn)和提高。

慢病毒載體系統(tǒng)由pGCSIL-GFP載體、pHelperl.0(gag/pol元件)載體、pHelper2.0(VSVG元件)載體三質(zhì)粒組成，其中pGCSIL-GFP載體含有能持續(xù)表達(dá)小RNA的元件，同時(shí)能表達(dá)熒光蛋白GFP，pHelperl.0和pHelper2.0含有病毒包裝所必需的元件。

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pGCSIL-GFP 質(zhì)粒圖譜

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pHelperl.0 質(zhì)粒圖譜

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pHelper2.0 質(zhì)粒圖譜

普健生物具有完善慢病毒包裝平臺(tái)，可以完成慢病毒包裝，穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建。

普健生物慢病毒包裝服務(wù)流程

1.構(gòu)建慢病毒RNAi干擾載體，質(zhì)粒提取。

2.慢病毒載體和包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞。

3.培養(yǎng)48~72小時(shí)，收集含有病毒的上清培養(yǎng)液。

4.病毒的純化，濃縮，分裝，-80℃保存。

5.目的基因滴度檢測(cè)。

6.實(shí)驗(yàn)報(bào)告。